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[求助]
hiTAIL-PCR求指導(dǎo)
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在下正在利用hiTAIL-PCR克隆玉米自交系中一段未知序列，參考的是劉耀光老師2007年發(fā)表的文章，首先利用B73參考基因?qū)Ψ磻?yīng)條件進行摸索。 LAD primer序列分別為：LAD1：ACGATGGACTCCAGAGCGGCCGCANANNNGGAA; LAD2: ACGATGGACTCCAGAGCGGCCGCTNTNNNGGTT; LAD3：ACGATGGACTCCAGAGCGGCCGCAGNANNCCAA; LAD4：ACGATGGACTCCAGAGCGGCCGCGANTNNNCGGT。 基因特異引物l利用Primer3.0分析Tm>68，序列如下：GSP1：TTAGTCCCAATGCAAACCGAGCCACTAAGC, GSP1：ACGATGGACTCCAGTCCGGCCGCACTTAGCAGTGCTGGTCTCAGTGG; GSP3：GAGTTCTCTTAGATCCGGCGCCATTGCCTG。 PCR反應(yīng)體系及程序與劉老師文章里一致，1%瓊脂糖電泳如下圖所示，求各位大俠指導(dǎo)，問題可能出在哪里，該如何改進，不勝感激！拜謝各位 hiTAIL-PCR B73.jpg |
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3樓2016-10-12 11:40:45
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