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Fe3O4磁珠為什么修飾不上COOH呢？
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最近做Fe3O4磁珠，主要目的應(yīng)用連接蛋白或抗體以分離細(xì)胞 按（J. Gao, X. Ran, C. Shi, H. Cheng, T.Cheng and Y. Su, Nanoscale, 2013, DOI: 10.1039/C3NR00931A.）水熱法合成了磁珠并TEOS包硅。 該文章重復(fù)性不錯(cuò)，得到的磁珠經(jīng)TEM分析分散性，均一性都很好，稍微有點(diǎn)欠缺就是磁珠穩(wěn)定性不是非常好，如果不包硅，2-3天在水溶液就變黃（氧化了）。這點(diǎn)也問(wèn)過(guò)文章作者，確實(shí)如此，包硅了就好多了。 下一步，我是要把磁珠 修飾成 COOH 磁珠，主要原理是 磁珠-TEOS硅化- APTES NH2化- 丁二酸酐 COOH化，按圖示原理進(jìn)行。磁珠-TEOS硅化按以上文獻(xiàn)，TEM測(cè)試無(wú)問(wèn)題，主要是APTES NH2化- 丁二酸酐 COOH化出現(xiàn)問(wèn)題。我也不知道究竟出了什么問(wèn)題，因?yàn)闂l件所限，無(wú)法去表征，只好接著做應(yīng)用和蛋白交聯(lián)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，做好的COOH磁珠和蛋白不發(fā)生交聯(lián)。 百思不得其解，不知道以下步驟哪里出了問(wèn)題。哪位熟悉的幫我看一下，究竟出了什么問(wèn)題COOH反應(yīng)步驟： （1） APTES 氨基化 取1/3硅化磁珠,約30mg) 溶解在25ml乙醇中，加1ml APTES，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)16 hr，反應(yīng)后用乙醇洗3遍磁分離。 （2） COOH化 取以上1/2反應(yīng)液，加10ml 乙醇，與800mg 溶解在DMSO（5ml）中的丁二酸酐混合反應(yīng)16小時(shí)，過(guò)量的DMSO用乙醇洗5次，磁力或離心分離，最后用4 ml乙醇溶解。 COOH磁珠與蛋白BSA的交聯(lián): 取以上磁珠1ml （濃度大約1mg/ml ），用buffer(0.1M MES, 0.15 M NaCl, pH4.9 ）磁分離洗2-3次；最后加0.67ml buffer，0.18ml EDC(10mg/ml),0.15ml NHS(10mg/ml) 常溫反應(yīng)2小時(shí)（做對(duì)照，對(duì)照不活化，加buffer替代），之后磁分離去除EDC/NHS；加0.06ml 0.5g/l BSA，常溫顛倒反應(yīng)24小時(shí)。反應(yīng)完后，磁分離上清，用BCA測(cè)蛋白濃度。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)：BSA基本只減少了10%左右，和對(duì)照（不加EDC/NHS活化）的蛋白濃度一樣，也就是說(shuō)交聯(lián)上COOH磁珠的只有10%左右（或者說(shuō)是非特異性吸附）。 哪位熟悉這個(gè)領(lǐng)域的請(qǐng)幫我看看，十分感謝，十萬(wàn)火急。 1.JPG |
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 磁珠 | 表面修飾-COOH |
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