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肉肉肉.鐵蟲 (小有名氣)
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[交流]
關(guān)于酵母表達(dá) 已有1人參與
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各位大神好！最近快被酵母表達(dá)煩死！已經(jīng)成功把蛋白片段的基因連接到ppic9k質(zhì)粒上，測序也顯示成功，然后電轉(zhuǎn)化到酵母GS115中，提取酵母基因組用AOX1通用引物和蛋白片段特異性引物分別做pcr鑒定，均有條帶，但是有一點不對勁，有文獻(xiàn)上說用AOX1通用引物pcr鑒定時Mut+應(yīng)該有兩條條帶，大的那條應(yīng)該是酵母里面AOX1片段的，但是我沒有，沒有的話說明就是Muts表型，照理說應(yīng)該也能誘導(dǎo)出蛋白，但是現(xiàn)在做了WB沒有目的條帶，還有用his標(biāo)簽鎳柱純化蛋白后沒有目的條帶，應(yīng)該是沒有誘導(dǎo)出蛋白，急死人了！我現(xiàn)在應(yīng)該怎么做？是我誘導(dǎo)染菌了嗎？因為酵母誘導(dǎo)產(chǎn)物好臭，但是我就是根據(jù)酵母誘導(dǎo)手冊做的，用的BMGY和BMMY，但是誘導(dǎo)液臭臭的，需要加點amp防止染菌嗎？還有就是我沒有z用G418篩選高拷貝就直接誘導(dǎo)了，是因為這個原因嗎？有大神做酵母表達(dá)蛋白的嗎？求解�。。�！ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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 蛋白表達(dá)純化鑒定精華 |
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2樓2015-11-30 17:08:40
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