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求助大神幫忙算一下試劑量
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GSH/GSSG含量測(cè)定 （1）提�。喝�0.5g材料，剪碎，置于預(yù)冷研缽中，加入預(yù)冷的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的磺基水楊酸6ml和少許石英砂，充分冰浴研磨。勻漿轉(zhuǎn)入10ml離心管中，于4℃下20，000×g離心20min，將上清液分裝，液氮冷凍后與-20℃保存或直接進(jìn)行抗氧化分析。（與上同） （2）GSSG含量測(cè)定：取200μl上清液，加入48μl 1.84mol/L三乙醇胺以中和樣液，加入100μl 10%乙烯吡啶（用70%乙醇配制），25℃水浴1h，以除去GSH，到時(shí)加入1412 μl 50mmol/L磷酸緩沖液（pH7.5，內(nèi)含25mmol/L EDTA），加入40μl 10mmol/L NADPH和160μl 12.5mmol/L DTNB（二硫硝基苯甲酸），混勻，25℃保溫10min，到時(shí)加入40μl 50U/L GR�？傮w積為2ml，立即混勻，讀出3min內(nèi)412nm處OD值。 （3）總谷胱甘肽（GSSG+GSH）含量測(cè)定：將步驟（2）中的乙烯吡啶用等體積的蒸餾水替代即可。 GSH含量=總抗壞血酸含量－GSSG含量 （4） 標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：以質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的磺基水楊酸為溶劑，用上述方法制作GSSG標(biāo)準(zhǔn)曲線。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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2樓2015-11-17 09:05:43
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