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鄭倩_smile鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
我的蛋白western曝光沒有任何條帶，一片空白，怎么回事？
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請(qǐng)教各位做蛋白western的高手們，本人最近做擬南芥葉片的蛋白western，做了好幾次了，曝光后片子上什么都沒有。轉(zhuǎn)膜后染色能看到蛋白條帶，之后5%的封閉液（2g奶粉+0.5g BSA至50mlTBST）封閉1h， 一抗1:100 4℃孵育過(guò)夜，二抗1:5000孵育1h，之后化學(xué)發(fā)光3min，壓片5min和20min，過(guò)夜都沒有條帶。我之前只成功過(guò)一次，是用野生型植株做的，發(fā)光后暗室內(nèi)能明顯看到膜結(jié)合抗體的部位在發(fā)光，后來(lái)的都看不到了，是我提的蛋白量太少了嗎？ 大家?guī)臀铱匆豢慈旧蟮哪ぁ?br /> 我提擬南芥葉片蛋白是用了50mg葉片，之前成功的那次用了200mg，提擬南芥葉片蛋白做western用量多少合適呢？ 跪求各位大神解答，感激不盡！�。。�！ 2015.11.6蛋白樣品.JPG |
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4樓2015-11-17 18:40:07
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2樓2015-11-17 10:25:56
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3樓2015-11-17 16:28:35
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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抗體，樣品本身原因，是否和上次做出來(lái)同一批樣品，先排除是不是樣品的原因，再考慮抗體的原因，在考慮是否是發(fā)光液的原因 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
5樓2015-11-17 20:37:13
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