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anqier0717新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
用GE蛋白純化儀分離不同分子量的膠原蛋白,求助。! 已有3人參與
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大家好,本人新手第一次做蛋白,很多問(wèn)題都不懂,請(qǐng)大神們不吝賜教。 試驗(yàn)?zāi)康模河茫牵诺牡鞍准兓瘍x純化一批膠原蛋白樣品,最終得到純的相同分子量的蛋白。 樣品描述:該膠原蛋白樣品分子量估計(jì)有10kd-180kd(有可能更大或更小,實(shí)驗(yàn)室的marker就這么大的,我只做了SDS-PAGE驗(yàn)證了一下)。 我想問(wèn)大家的問(wèn)題是: 。薄⑽抑坝贸瑸V膜過(guò)濾,但是效果不好,無(wú)論是用0.1μm的膜過(guò)濾還是15萬(wàn)D的膜過(guò)濾,總有一段95KD-72KD的蛋白(SDS-PAGE驗(yàn)證),還有180kd-130kd(6%膠跑出來(lái)的)、43-34kd(12%的膠跑出來(lái)的)、17-10kd(12%和15%的膠都跑出來(lái)了)的條帶,但是都不純。所以才選用蛋白純化儀純化,希望能得到純的相同分子量的蛋白。請(qǐng)問(wèn)我這個(gè)思路是正確的嗎? 。、要用蛋白純化儀純化要選什么柱子,是否需要買脫鹽柱?(不確定這些蛋白分子量是否很接近,目前還不知道蛋白PI)。 。、求具體的實(shí)驗(yàn)步驟,或者告訴我一些可以學(xué)習(xí)的教材。 謝謝大家了,目前想到的問(wèn)題就這些,希望大家一起交流探討。! |
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