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anqier0717新蟲 (初入文壇)
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[求助]
用ＧＥ蛋白純化儀分離不同分子量的膠原蛋白，求助�。。� 已有3人參與
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大家好，本人新手第一次做蛋白，很多問題都不懂，請(qǐng)大神們不吝賜教。 試驗(yàn)?zāi)康模河茫牵诺牡鞍准兓瘍x純化一批膠原蛋白樣品，最終得到純的相同分子量的蛋白。 樣品描述：該膠原蛋白樣品分子量估計(jì)有１０ｋｄ－１８０ｋｄ（有可能更大或更小，實(shí)驗(yàn)室的ｍａｒｋｅｒ就這么大的，我只做了ＳＤＳ－ＰＡＧＥ驗(yàn)證了一下）。 我想問大家的問題是： １、我之前用超濾膜過濾，但是效果不好，無論是用０.１μｍ的膜過濾還是１５萬(wàn)Ｄ的膜過濾，總有一段９５KD-72KD的蛋白（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ驗(yàn)證），還有１８０ｋｄ－１３０ｋｄ（６％膠跑出來的）、４３－３４ｋｄ（１２％的膠跑出來的）、１７－１０ｋｄ（１２％和１５％的膠都跑出來了）的條帶，但是都不純。所以才選用蛋白純化儀純化，希望能得到純的相同分子量的蛋白。請(qǐng)問我這個(gè)思路是正確的嗎？ ２、要用蛋白純化儀純化要選什么柱子，是否需要買脫鹽柱？（不確定這些蛋白分子量是否很接近，目前還不知道蛋白ＰＩ）。 ３、求具體的實(shí)驗(yàn)步驟，或者告訴我一些可以學(xué)習(xí)的教材。 謝謝大家了，目前想到的問題就這些，希望大家一起交流探討！��！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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anqier0717: 金幣+2, ★有幫助 2015-11-20 11:50:19
anqier0717: 金幣+2, ★有幫助 2015-11-20 11:50:19
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首先你要確定自己蛋白多大，跑過的電泳看看純度如何，如果雜蛋白跟你目的蛋白差不多，估計(jì)分子篩分不開，可以考慮離子交換…… 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
7樓2015-11-19 12:45:20
2樓2015-11-18 22:18:40
anqier0717
新蟲 (初入文壇)
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3樓2015-11-18 22:37:53
a86052
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4樓2015-11-19 09:17:31
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