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vivi3168新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
指狀青霉菌絲掃描電鏡樣品前處理 已有2人參與
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| 實(shí)驗(yàn)需要用掃描電鏡觀察抑菌劑處理過(guò)的指狀青霉菌絲表面形態(tài)的變化，我用的是PDA固體培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌種，文獻(xiàn)上說(shuō)是從菌落邊緣取一菌餅，放入2.5%的戊二醛中固定，然后PBS漂洗、梯度乙醇脫水、再干燥，我不明白這個(gè)菌餅的取法，是連帶著培養(yǎng)基也取出嗎？PBS漂洗是離心還是只是沖洗幾遍？我想烘干或自然晾干，如果帶著培養(yǎng)基的話，培養(yǎng)基會(huì)有殘留吧？電鏡小白求指導(dǎo)啊。。。。。。。 |
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vivi3168
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9樓2015-11-22 12:24:56
lark001
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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根據(jù)樓主的問(wèn)題，下面幾點(diǎn)可作參考： （1）“PDA固體培養(yǎng)基培養(yǎng)的菌種，文獻(xiàn)上說(shuō)是從菌落邊緣取一菌餅”，個(gè)人認(rèn)為是用接種環(huán)在菌落上刮取菌體，輕輕地、盡量不刮到培養(yǎng)基；液體培養(yǎng)基的話，高速離心，棄去培養(yǎng)基即可； （2）PBS漂洗：這是為了去除上一步的固定液，可以沖洗，也可以加入PBS，輕輕振蕩，混合后，再棄去PBS； （3）經(jīng)過(guò)梯度脫水后，是可以自然晾干的，這樣會(huì)比較慢，可以將其放置于接種臺(tái)，打開(kāi)風(fēng)扇，會(huì)快一些；當(dāng)然用臨界點(diǎn)干燥更好。 祝實(shí)驗(yàn)順利！ |
2樓2015-11-19 09:44:04
vivi3168
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3樓2015-11-19 13:11:06
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| 首先取樣時(shí)在菌落邊緣連同培養(yǎng)基切成1-2 X 5 mm大小的樣塊，最好保持菌塊原樣，否則會(huì)影響菌絲形態(tài)。樣品處理過(guò)程不會(huì)用到離心機(jī)，漂洗就是用PBS浸泡，將樣品中的溶液置換成PBS，包括之后的梯度脫水和乙酸異戊酯置換，之后直接用吸管或移液槍直接吸出即可。干燥是指用CO2臨界點(diǎn)干燥，除去樣品中的水分。之后再經(jīng)噴金鍍膜后就可以上機(jī)看了。一般情況下，電鏡室應(yīng)該有負(fù)責(zé)的老師可以請(qǐng)教和制樣方法參考。 |
4樓2015-11-19 22:55:35
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