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etb1木蟲 (正式寫手)
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[交流]
用transwell做細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)，求教 已有4人參與
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我的實(shí)驗(yàn)步驟大致是這樣的： 1. Hela細(xì)胞與藥物在培養(yǎng)瓶中共同孵育24小時(shí) 2. 移除原培養(yǎng)基，用無血清培養(yǎng)基洗滌幾次；用胰酶消化并用無血清培養(yǎng)基收集細(xì)胞 3. 向transwell（8微米孔徑）下室加600微升含10%FBS的培養(yǎng)基，上室加入200微升細(xì)胞懸液；孵育24小時(shí) 4. 移除上、下室的液體 5. 下室加入600微升4%多聚甲醛固定細(xì)胞半小時(shí) 6. 移除多聚甲醛，用棉簽擦除未穿過膜的細(xì)胞 7. 下室加入600微升0.1%結(jié)晶紫染色10分鐘 8. 用PBS洗滌小室 9. 在顯微鏡下觀察細(xì)胞并計(jì)數(shù)。 由于我做的是細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)而不是侵襲實(shí)驗(yàn)，所以沒加基質(zhì)膠。請大家?guī)臀铱纯�，我的�?shí)驗(yàn)步驟有沒有錯(cuò)誤或需要改進(jìn)的地方？ 另外我還有不懂的問題想請教。transwell小室中的那個(gè)膜是半透膜嗎？如果不是的話，8微米孔徑對FBS來說是很大的，上下室FBS濃度不同，下室FBS不久會(huì)很快擴(kuò)散到上室而達(dá)到濃度平衡了嗎？這樣的話，上室細(xì)胞還怎么遷移到下室？ 我是做transwell實(shí)驗(yàn)的新手，請大家多多指點(diǎn)。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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5樓2016-01-23 20:39:48
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6樓2016-01-24 11:46:55
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我也是24孔板，可是一般不是只能看到小室上室的細(xì)胞嗎？所以顯微鏡調(diào)節(jié)是可以看到24底部的細(xì)胞的？喔本來還在想是不是要先把小室拿出來才能看呢，謝謝 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
7樓2016-01-24 22:00:30
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