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xiaoping1986銀蟲 (著名寫手)
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[求助]
糞便基因組提取方法 已有3人參與
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使用耶拿核酸提取系統(tǒng)及其配套的innu PREP DNA Kit-IPC16試劑盒提取糞便基因組，在1%瓊脂糖膠上有明顯的marker條帶，但是基因組條帶卻沒有（附件中有提取基因組的跑膠照片）？提取時糞便是新鮮糞便，加液氮研磨后取20mg,按照試劑盒說明書提取，想知道是什么問題沒有提取到基因組？自己推測原因是：1、試劑盒不適合；2、糞便處理方法不對，糞便用量不夠？想求助下有沒有人用過這個試劑盒，在提取方法上有什么需要改進(jìn)的？有沒有可以推薦使用的專門提取糞便基因組的試劑盒？請不吝賜教，謝謝！ Cache_237d955ee243daea..jpg |
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2樓2015-11-24 11:14:39
xiaoping1986
銀蟲 (著名寫手)
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3樓2015-11-24 14:24:22
4樓2018-11-09 09:42:55
摩天輪711
新蟲 (初入文壇)
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- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
5樓2018-12-05 14:05:35
【答案】應(yīng)助回帖
| 糞便首先需要預(yù)處理：糞便標(biāo)本加人裝有2mL無菌PBS緩沖液(0.05mol/L，pH 7.4)試管中充分振蕩搖勻5～10min后3000轉(zhuǎn)/分（rpm）離心5min，收集上清液，此步驟重復(fù)2次,最終收集上清液每份1ml置于1.5ml 離心管中。然后上清液12000rpm離心l0min，棄上清后，沉淀物在lmL雙蒸水(ddH20)中懸置，混和后12000rpm離心5min，此步驟重復(fù)2次，收集沉淀。接下來的步驟就是用酚氯仿的抽提的方法。不過這種化學(xué)法花費時間長效果也不一定好，而且苯酚氯仿什么的有毒，用試劑盒操作就安全 簡便多了，時間短，差不多半小時就可以了。常用的有凱杰QIAGEN，天根TIANGEN，百代BIODAI等。 |
6樓2019-03-13 08:59:07
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