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[求助]
檢測細(xì)菌產(chǎn)嗜鐵載體的CAS培養(yǎng)基里的10%的酪蛋白如何配制時才能不產(chǎn)生沉淀？
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要檢測分離的細(xì)菌是否能夠產(chǎn)生嗜鐵載體使用CAS培養(yǎng)基，配方如下： CAS 染液：含 1 mmol /L CAS，0.1 mmol /L FeCl3，4 mmol/L HDTMA，0.1 mol/L； pH 6.8 無機(jī)磷酸鹽緩沖液：（Na2HPO4•12H2O 2.427g，KH2PO4 0.075g，NaH2PO4•2H2O 0.5905g，NaCl 0.125g，NH4Cl 0.250g，100 mL 使用時 10 倍稀釋）； 每 100 mL 含 20 % 蔗糖溶液 1 mL，10 %酸水解酪素 3mL，1mmol/L CaCl2 100 μL，1 mmol /L MgSO4 2mL，瓊脂 1.8g； 在約 60 ℃ 時緩慢加入無機(jī)鹽溶液和 CAS 染液各 5mL，可得藍(lán)色檢測培養(yǎng)基。配制用水均為去離子水，制備培 養(yǎng)基時所用玻璃器皿須 6mol /L鹽酸浸泡，用雙蒸水沖洗干凈； 在做實驗的時候配制10%的水解酪蛋白用0.2M/L的NaoH加熱溶解，然后每 100 mL 含 20 % 蔗糖溶液 1 mL，10 %酸水解酪素 3mL，1mmol/L CaCl2 100 μL，1 mmol /L MgSO4 2mL，瓊脂 1.8g配制成固體培養(yǎng)基，其中定容時用HCL調(diào)節(jié)了培養(yǎng)基的pH值至7,此時培養(yǎng)基溶液仍為澄清，但是滅菌之后就出現(xiàn)了沉淀。哪位大神知道CAS培養(yǎng)基該如何配制才不會產(chǎn)生沉淀呀？ SOS SOS SOS |
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2樓2016-03-24 08:36:43
3樓2016-06-23 20:09:08
馮宇晴
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【答案】應(yīng)助回帖
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你好，我現(xiàn)在現(xiàn)在做鐵載體鑒定平板，請問能否告知以下內(nèi)容的詳細(xì)步驟; 先配制好1mmol/L的CaCl:溶液、1mmol/L的MgSO4·7H2O溶液、10%的酸水解酪蛋白溶液(121攝氏度，15min單獨滅菌);再分別取0.2mL的CaCl:溶液、0.2mL的MgSO4·7H2O溶液、6mL的10%的酸水解酪蛋白溶液，加入生物緩沖液Pipes(sigma)，調(diào)pH6.8一7.0。去離子水定容到100mL。加入g2瓊脂粉，121攝氏度，15min。當(dāng)以上的固體培養(yǎng)基滅完菌后，溫度降低到60攝氏度時，以5mLCAS藍(lán)色檢測液體/每100mLCAS培養(yǎng)基的量沿著三角瓶壁加入，混合均勻。 pipes 加多少，什么時候調(diào)節(jié)PH？ |
4樓2018-03-19 20:48:58
張高粱
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5樓2018-04-13 20:17:24
張高粱
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6樓2018-04-13 20:19:46
7樓2018-12-27 20:44:06
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