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抹茶曲奇金蟲 (小有名氣)
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[求助]
用高效液相色譜技術(shù)測定蕨類植物—翠云草花色素苷和葉綠素種類和含量，方案是否可行？
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花色素苷：采集翠云草葉片，用流水沖洗干凈，真空冷凍干燥72小時(shí)研磨成粉備用。稱取1.00 g 粉末， 用體積分?jǐn)?shù)為1%的甲醇鹽酸（97.0 mL 甲醇+ 3.0 mL體積分?jǐn)?shù)為36%的鹽酸）萃取， 定容至25.0 mL，完全遮光后放置在4 ℃冰箱冷藏室中萃取24 h， 將上清轉(zhuǎn)入新的容器中4℃遮光保存，再向殘?jiān)屑尤?5.0 mL甲醇鹽酸，相同條件下萃取12 h，重復(fù)該操作2次，將3次萃取液的上清合并，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮后用甲醇鹽酸定容至25.0 mL。{吸取600.0 μL甲醇鹽酸萃取液與750.0 μL 的2.0 mol·L－1 鹽酸混勻，恒溫（95 ℃）加熱45 min。加熱后迅速冰上冷卻，加入370.0μL異戊醇劇烈震蕩混勻，4 ℃下6 000 r min－1 離心5 min，待混合液分層后，將上相移至新的離心管中用于檢測。} 注：括號內(nèi)為水解過程 葉綠素：先稱取0.50 g 粉末， 再用體積分?jǐn)?shù)為90%丙酮溶液［V（丙酮）∶V（乙醇）＝9∶1］萃取并定容至20.0 mL， 然后放置于4℃冰箱冷藏室萃取48 h。 高效液相色譜—二級管陣列檢測法（HPLC-DAD）：所用高效液相色譜儀（L-2000）選用L-2455 型二極管陣列檢測器進(jìn)行檢測。儀器參數(shù)： C18 柱， 柱溫40℃， 進(jìn)樣量10.0μL， 流速0.50 mL·min－1， 檢測波長為280 nm， 520 nm， 535 nm， 540 nm。流動(dòng)相參數(shù)： A 為體積分?jǐn)?shù)為0.05%的甲酸水溶液， B為色譜級乙腈。梯度洗脫程序?yàn)椋?0～40 min， A 95%～0， B 5%～100%； 40~60 min， A 0，B100%。 |
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