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lxl1213新蟲 (小有名氣)
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[求助]
蛋白質(zhì)——非還原型電泳，包涵體復(fù)性 已有1人參與
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包涵體復(fù)性遇到許多問題，首先是非還原型電泳，電泳條帶為什么老是中間有個洞啊，如圖片所示，同一個樣品，第一條道是還原型的，第二條道是非還原型的，為什么會這樣。 然后第二個問題，包涵體蛋白復(fù)性，我的包涵體溶解液為8M尿素，100mM磷酸二氫鈉，10mM Tris-cl，pH 8.5,基礎(chǔ)復(fù)性液是50mM Tris-cl，2mM EDTA, pH 8.5，問題來了，我把包涵體溶液一滴入復(fù)性液中就會出現(xiàn)沉淀，而直接滴入蒸餾水中反而沒有什么沉淀，是什么問題呢？ BD1183FD-17A0-4CB4-B474-765E3114DB74.png |
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- 專業(yè): 生物化學(xué)
3樓2016-06-27 09:28:51
【答案】應(yīng)助回帖
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出現(xiàn)蛋白析出，肯定是條件變化太劇烈了。 復(fù)性應(yīng)該采取復(fù)性液濃度和PH值逐漸變化的方法，例如根據(jù)包涵體的溶液成分，每隔1個PH或濃度值配置一種溶液，逐步透析到正常。此外透析時必須濃度極低，條件溫和，使蛋白質(zhì)能夠正確折疊。但是復(fù)性的比率應(yīng)該很低。 若加變性劑尿素可加到2M，鹽酸胍可加到1-1.5M； 另外可將甘油濃度增加，范圍可在≤30%，且在復(fù)性樣品中也可加適量甘油。給你推薦個文章感覺兩篇差不多都可以看看包涵體復(fù)性常見問題和蛋白質(zhì)復(fù)性常見問題 |
2樓2016-01-14 11:34:08
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