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siRNA轉(zhuǎn)染的對(duì)照 已有1人參與
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1.Negative control. 2.Hsp70 siRNA 3.Non-silencing siRNA 為什么做兩個(gè)對(duì)照？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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| 這兩組的對(duì)照還沒有做過(guò)，siRNA的轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染時(shí)一定要注意脂質(zhì)體的毒性,隨時(shí)觀察細(xì)胞狀態(tài),一旦細(xì)胞狀態(tài)變化要及時(shí)終止轉(zhuǎn)染,但轉(zhuǎn)染效率與轉(zhuǎn)染時(shí)間有一定的關(guān)系,太短的轉(zhuǎn)染時(shí)間會(huì)導(dǎo)致轉(zhuǎn)不進(jìn)去而轉(zhuǎn)染失敗,如果你的細(xì)胞比較耐受,你可以在嚴(yán)密監(jiān)視細(xì)胞的情況下盡量延長(zhǎng)轉(zhuǎn)染時(shí)間。很多人安利RFECT,或許你可以試試。 |
2樓2019-03-22 10:41:48
你是路人甲
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 232
- 散金: 42
- 帖子: 191
- 在線: 24.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 13104654
- 注冊(cè): 2018-12-09
- 專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
| 我們實(shí)驗(yàn)室用RFect sRNA Transfection Reagent，細(xì)胞密度在45%左右 ,設(shè)置siRNA終濃度10nM,30nM,50nM,100nM四個(gè)梯度，每個(gè)梯度最好做2個(gè)復(fù)孔，一般做轉(zhuǎn)染前一天鋪板，用來(lái)稀釋siRNA和稀釋轉(zhuǎn)染試劑的培養(yǎng)基必須是無(wú)血清培養(yǎng)基，因?yàn)檠宓拇嬖跁?huì)干擾siRNA與轉(zhuǎn)染試劑的混合，并且影響轉(zhuǎn)染效率。轉(zhuǎn)染后48h收細(xì)胞做qPCR基因水平檢測(cè)或者轉(zhuǎn)染后72h收細(xì)胞提蛋白做western Blotting蛋白水平檢測(cè)，一般情況設(shè)置一個(gè)空白組，一個(gè)對(duì)照組 |
3樓2019-04-01 13:50:20
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