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Mingle_Su銀蟲 (小有名氣)
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CoIP/蛋白互作|| 陰性對(duì)照雜出條帶 ||FLAG HA Triton 洗滌 原生質(zhì)體瞬時(shí)表達(dá) 已有2人參與
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陰性對(duì)照的也被沉淀下來了，一周的實(shí)驗(yàn)就這樣廢了，請(qǐng)各位資深朋友幫分析下原因。每個(gè)樣品用了20ul帶FLAG抗體的磁珠（sigma），孵育結(jié)合后用0.1%的Triton 100 洗滌4次，最后用50mM的Tris-HCl pH=7.5 洗滌，每次洗滌均用1mL的buffer。個(gè)人覺得應(yīng)該不是珠子沒洗干凈，另外考慮蛋白直接結(jié)合磁珠，兩個(gè)完全不相關(guān)的蛋白都可以結(jié)合磁珠更加不可能。只能想到以上兩個(gè)比較直接原因，請(qǐng)各位高手指教。 具體問題見下圖，謝謝！ CoIP |
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8樓2015-12-13 23:01:29
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3樓2015-12-13 11:37:54
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4樓2015-12-13 13:32:07
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5樓2015-12-13 13:36:18
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6樓2015-12-13 14:30:38
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7樓2015-12-13 17:17:10
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你是不是把ha和flag兩個(gè)抗體弄混了，你上下兩個(gè)圖換換結(jié)果就很好了 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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Mingle_Su9樓2015-12-13 23:03:10
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但真的用錯(cuò)沒有，F(xiàn)LAG的珠子是黑色的磁珠，HA的珠子是白色的沒有磁性的。而且FLAG標(biāo)簽的蛋白在IP后明顯富集了。。。 10樓2015-12-13 23:56:09
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