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生物mishar銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
SYBR熒光定量溶解曲線
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急！急��！急�。�！ 真菌的2個(gè)目的基因--9300和5053，引物設(shè)計(jì)好，先用DNA檢驗(yàn)，溶解曲線圖分別為DNA9300和DNA5053。然后做定量，溶解曲線圖分別為RNA9300和RNA5053。 RNA用Trizol提取，OD值和電泳檢測(cè)都過關(guān)。反轉(zhuǎn)錄前做gDNA去除處理，陰性對(duì)照在40個(gè)循環(huán)內(nèi)的CT值為Undetermined（用的是Takara整套試劑）。 定量PCR用3步法擴(kuò)增程序:（儀器為ABI 7500） stage1: 95℃ 30s stage2: 95℃ 5s, 56℃ 30s, 72℃ 30s, 40個(gè)循環(huán) Melt Curve Stage 目的基因?yàn)楹螘?huì)出現(xiàn)這種情況，究竟是哪里出了問題？？？？（actin一直都沒有問題） 煩請(qǐng)高手指點(diǎn)迷津！謝謝��！ DNA9300.jpg DNA5053.jpg RNA9300.jpg RNA5053.jpg |
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生物mishar
銀蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 235.7
- 帖子: 129
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- 蟲號(hào): 2586968
- 注冊(cè): 2013-08-08
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學(xué)
2樓2015-12-16 10:03:03
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