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北京石油化工學院2026年研究生招生接收調劑公告
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屁桃粉

新蟲 (小有名氣)

[求助] 哪位精通NCBI數(shù)據(jù)庫的大神可以進來幫我看看這個基因嗎? 已有2人參與

前提:之前在PDB上找了一個來源于黑曲霉的α-淀粉酶基因,找生物公司全基因合成了。但是表達不出來,原因很有可能是基因的ORF區(qū)存在缺失。搞了一年,現(xiàn)在研三,迫不得已得換一個基因合成,同樣來源的α-淀粉酶。
1、小女找到了NCBI序號為xm_001393589.2和xm_001395291.2的α-淀粉酶,但是由于這兩種酶在NCBI上的說明都沒有顯示出自那篇參考文獻,顯示是概念性轉換的結果,所以很擔心如果在這兩條序列中任選一條合成(只合成CDS區(qū)),不知道是否能正常表達。
2、兩條序列中哪條更有可能表達呢?兩條序列的注釋都不是很明確,請大神幫忙解釋一下可好。
3、如何要全基因合成(CDS區(qū)),那是否要加上信號肽序列呢, 還是說只需要合成成熟肽即可,我的畢赤酵母載體上有信號肽,如何加上了基因自帶的信號肽序列會不會對于他的表達更完整了呢?
請NCBI大神來解答呢。 拜托拜托。
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屁桃粉

新蟲 (小有名氣)

引用回帖:
6樓: Originally posted by stone2239 at 2015-12-15 15:15:14
你和“柚小西”是一個人嗎?
我認為只合成成熟肽即可,如果不去原序列信號肽,表達出的蛋白有兩個信號肽,信號肽切割時未必能保證都切掉,如果沒有都切掉,那留下的信號肽肯定會影響蛋白質折疊,最終影響蛋白質活 ...

確實是同一人, 只是由于金幣不夠,借來這個師妹的號發(fā)帖求助的。
哈哈。哈哈。
請問合成前體蛋白可以正常表達嗎?
7樓2015-12-15 16:05:23
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admission

木蟲 (著名寫手)

看看是不是這篇文獻,里面好像提到你所要的版本號
鏈接: http://pan.baidu.com/s/1X9kr8 密碼: k2dd
你的CDS應該是這部分吧,全基因合成應該不便宜吧,如果是土壕實驗室,請忽略
一般做法是提RNA,反轉錄,合成ORF。如果沒有內含子,也應該可以直接用DNA合成。
             atggtctc
      361 aatgtcggcc ctgcggcacg ggcttggggt cctctatctt gctagctggc tggggtcgtc
      421 gctggctgcc agcaccgagc aatggaagtc ccggtcaatc tatcagacca tgacggatcg
      481 gttcgcgcgc actgatggct caaccacctc cccctgcaac accacggagg gtctgtactg
      541 tggtggtacc tggcgcggca tgatcaacca tctggattac atccagggga tgggctttga
      601 tgccgtcatg atctccccta tcatcgagaa cgtcgaaggt cgcgtggagt acggagaagc
      661 ctatcacggc tattggcccg tggatctgta ctccctcaac tcgcactttg gaacccacca
      721 ggatctactg gacctgagtg atgccctgca tgctcgcgac atgtatctga tgatggacac
      781 agtcatcaac aacatggcct acatcaccaa tggctccgac cccgccaccc acatcgacta
      841 ctcaaccctg acccccttca atagctcgtc ttactaccat ccctactgta agatcaccga
      901 ctggaataac ttcaccaatg cccagctgtg ccaaaccggt gacaacatcg tggccttgcc
      961 cgatctgtat accgagcatg ccgaggtgca agaaaccctg agcaactggg ccaaggaagt
     1021 catctccacc tattccatcg acggcctccg catcgatgcc gcaaaacatg tgaaccccgg
     1081 cttcctgaag aatttcggcg atgcgcttga tatcttcatg accggcgaag tgctgcagca
     1141 agaggtcagc acaatctgcg attatcagaa caactacatc ggcagtctcc cgaattaccc
     1201 cgtctactac gccatgttga aggcctttac cttgggcaac accagcgccc tggccactca
     1261 ggtccagtcg atgaagaatt cctgtaatga tgtgaccgcc ttgtcgtcat tctccgaaaa
     1321 ccacgatgtc gcacgatttg ccagcatgac ccatgacatg gctctcgcga agaatattct
     1381 cacattcact cttctcttcg acggtgttcc catgatctat caaggtcaag agcagcatct
     1441 cgacggccct ggcagtccgg aaaaccgaga agcgatatgg ctctctgagt acaacaccga
     1501 cgccgagctc tacaagttga tcggcaagtt gaacgccatc cggaagcacg cctaccgact
     1561 cgacaatcac taccccgatg tcgagacgta ccccatcttc gaaggtggca gtgaactggg
     1621 attccgcaag ggaatcgaag gtcgacaggt ggtcatgctt ctgtccacgc aaggcacgaa
     1681 cagcagcgct tacaacctct cgatgccggt gagtttcacg ggtggcacag tagtgaccga
     1741 gattctgaac tgcgtcaact acacggtcaa cacccagagc gaactcgtgg ttccgatgga
     1801 taaaggagag ccgcgcgtgt tcttcccggc ggatctgatg cccggcagtg ggctgtgcgg
     1861 acttcctgtc gcgaatgtca cctatgctgc cttgaggacg cagggtgcag cggcggcgga
     1921 ggctgccttg tcgctaggta tcaagactga tgcagcttct agtgctttgc tttctctggg
     1981 gctgtctgtg gtggcgggtc tgattgtggg gatgtggtaa tatgctgata gctacagatg
     2041 ggttgagata tattatcatg
2樓2015-12-15 10:30:08
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屁桃粉

新蟲 (小有名氣)

引用回帖:
2樓: Originally posted by admission at 2015-12-15 10:30:08
看看是不是這篇文獻,里面好像提到你所要的版本號
鏈接: http://pan.baidu.com/s/1X9kr8 密碼: k2dd
你的CDS應該是這部分吧,全基因合成應該不便宜吧,如果是土壕實驗室,請忽略
一般做法是提RNA,反轉錄,合成O ...

親, 感謝你的幫忙,可是系統(tǒng)顯示的不是應助回帖, 我給不了金幣了,抱歉抱歉。
有一個問題需要請教,我粗略看了一下這個A.niger CBS513.88的全基因測序文章,看到關于α-淀粉酶的基因有四個,可是沒有找到具體在NCBI中的序列編號呢?我們實驗室都是全基因合成的,因為沒有模板,所以,我最擔心的是:沒有其他文獻顯示有人做過這個基因的外源表達,我擔心表達不出來。畢竟研三了哎,麻煩親能給與一些如何找到你貼出來的基因序列的過程。
哪位精通NCBI數(shù)據(jù)庫的大神可以進來幫我看看這個基因嗎?
捕獲1.PNG

3樓2015-12-15 11:05:52
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stone2239

鐵桿木蟲 (著名寫手)

【答案】應助回帖

★ ★ ★
感謝參與,應助指數(shù) +1
屁桃粉: 金幣+3, 有幫助 2015-12-15 13:16:50
不需要加你自己的信號肽,酵母表達載體上的信號肽可以保證胞外表達。
4樓2015-12-15 11:44:03
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