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PCR引物M13 M4和M13 RV 的堿基序列
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各位大俠 請(qǐng)教大家一個(gè)問(wèn)題，我采用同樣的一個(gè)樣品（目的片段約為500bp），以M13 M4和M13 RV為引物，相同PCR條件去做菌液PCR，出現(xiàn)不同大小片段的基因片段，為什么？ 詳情如下： 1. 提取DNA，PCR擴(kuò)增，未發(fā)現(xiàn)雜帶，于是普通DNA純化，并加A和連接，做菌液PCR，目的片段大小為750bp。 2.提取DNA，PCR擴(kuò)增，發(fā)現(xiàn)雜帶，于是切膠回收DNA純化，并加A和連接，做菌液PCR，目的片段大小為500bp。 問(wèn)題如下： 1. 不知道M13Z這對(duì)引物的堿基數(shù)目有多少？ 2. 兩次差別這么大是為什么？跟純化過(guò)程有直接關(guān)系嗎？ 3. 另外，電泳的電壓對(duì)PCR的結(jié)果會(huì)產(chǎn)生影響嗎？我這兩次的電壓有些差別 謝謝  |
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