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wa312582478新蟲 (初入文壇)
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[求助]
免疫印跡出現(xiàn)的問題
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新手一枚，最近在做免疫印跡 1.我的蛋白是重組蛋白（65KDa）含6個(gè)His標(biāo)簽，來(lái)源于乳桿菌某蛋白的部分基因，連接重組到大腸桿菌（BL21（DE3））并誘導(dǎo)表達(dá)； 2. 分離純化后，送至中科院遺傳動(dòng)物發(fā)育所進(jìn)行多抗的制備，一抗動(dòng)物為小鼠，共四只； 3.四只抗體都用ELASA做了效價(jià)評(píng)估，2號(hào)效價(jià)最好； 4.現(xiàn)在我設(shè)立四個(gè)組分別做了WB和ELASA：重組蛋白、大腸桿菌蛋白、乳桿菌蛋白和植物乳桿菌蛋白。想用以檢測(cè)該蛋白在微生物界里的分布狀況； 5.可結(jié)果存在很大問題，重組蛋白信號(hào)有三條帶，但主帶（目的蛋白條帶）信號(hào)最強(qiáng)；大腸桿菌蛋白有微弱的多條信號(hào)（考慮是制備抗體的抗原不純）； 乳桿菌蛋白和植物乳桿菌蛋白皆無(wú)任何信號(hào)？？？ 但是ELASA各個(gè)信號(hào)都都為陰性對(duì)照的兩倍以上，也就是說(shuō)用四個(gè)蛋白對(duì)應(yīng)菌體來(lái)做ELASA結(jié)果都為陽(yáng)性。 想請(qǐng)教一下各位高手問題出在哪里？急急急�。。。。� |
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