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oliviashane新蟲 (小有名氣)
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[求助]
硫酸鹽還原菌dsrAB基因的real time PCR的問(wèn)題
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問(wèn)題1. 溶解曲線出現(xiàn)很多雜峰，分別出現(xiàn)在主峰的前面和后面，這個(gè)是什么原因造成的呢？雜峰個(gè)自又代表什么東西呢？如圖2，3. 問(wèn)題2. 樣品的溶解曲線雖然和標(biāo)準(zhǔn)品的溶解曲線的峰稍有偏離但是位置大致相同，這可以認(rèn)為是同一物質(zhì)嗎？有的樣品的溶解曲線與標(biāo)準(zhǔn)品的溶解曲線峰的位置雖然相同，但是比標(biāo)準(zhǔn)品的峰要寬，這個(gè)也可以認(rèn)為是同一物質(zhì)嗎？如圖4，5，6 問(wèn)題3. 標(biāo)準(zhǔn)品1*10^9的擴(kuò)增曲線和1*10^8以及1*10^7的擴(kuò)增曲線在進(jìn)入平臺(tái)期后沒(méi)有達(dá)到同一高度，這是什么原因造成的呢？或者說(shuō)明了什么呢？如圖1 我的pcr的條件是95℃ 30s；95℃ 15s，62℃ 30s，72℃ 30s，45cycles；95℃ 15s，60℃ 30s，95℃ 15s。 希望可以減少雜峰的產(chǎn)生，出單一峰，pcr的條件改需要如何改進(jìn)呢？求各位專業(yè)人士的幫助，謝謝大家呢。 1.jpg 2.jpg 3.jpg 4.jpg 5.jpg 6.jpg |
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2015-12-24 16:42:46, 99.48 K
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2樓2017-04-11 15:45:24
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