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多肽合成 抗原多肽常見的一些基本問題
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1、多肽與載體蛋白交聯(lián) 對在動物體內(nèi)產(chǎn)生免疫反應(yīng)而言，大多數(shù)多肽的分子量都太小。將多肽與載體蛋白如KLH等交聯(lián)之后，不僅能增加抗原的大小，也能增強免疫性。我們可以提供與KLH和BSA兩種蛋白的交聯(lián)。大多數(shù)客戶選擇與KLH交聯(lián)，因為KLH的免疫性更好，而且BSA在很多實驗中作為Blocking試劑，由于動物體內(nèi)既會產(chǎn)生對多肽的抗體也會產(chǎn)生對載體蛋白的抗體，這樣會出現(xiàn)假陽性。 2、抗體的使用 由于抗體與很多生物分子，以蛋白和多肽等尤為顯著，有很強的結(jié)合能力，抗體在生物醫(yī)學(xué)研究中占據(jù)獨特的重要地位，在對蛋白的特性、含量的測定、分布情況的分析和蛋白的確證等方面都需要用到抗體。例如：診斷試劑盒如早孕試劑盒等，蛋白microalloy、immunohistochemistry 和普通的ELISA實驗等。由于抗體有對特定分子很強的結(jié)合能力的特點，用抗體進行體內(nèi)治療成了許多努力的方向。成功的范例包括Genetech的Herceptin,用于治療一類特殊的乳腺癌和IDEC藥業(yè)公司的Ritaxan，用于特定類型的Non-Hodgkin`s Lymphomas B-細胞。 3、抗原和識別區(qū)域： 大多數(shù)情況下，antigen和immunogen兩個字是可以互換使用的，它們的差別是很小的。他們是分別指一個分子與免疫系統(tǒng)之間的兩種類型的相互作用。一個immunogen是指能使一個生物組織的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫反應(yīng)的分子，而一個antigen是指能與這種免疫反應(yīng)的產(chǎn)物結(jié)合的分子，所以immunogen一定是antigen，但antigen不一定是immunogen，我們這里通用antigen，特指能與免疫反應(yīng)的產(chǎn)物—抗體結(jié)合的分子。識別區(qū)域（epitopes）是指一個抗原分子中一個與抗體直接結(jié)合的一段特定的序列，對于任何抗原（抗原蛋白），很有可能有多個抗體識別區(qū)域，對生產(chǎn)抗體而言，易于抗體識別的部位的識別區(qū)域最 4、進行KLH交聯(lián)的化學(xué)方法 我們用MBS活化KLH，這樣能將載體蛋白（KLH）上面的自由-SH與多肽末端的Cys的側(cè)鏈-SH連接起來，這種方法直接，特異性高，而且穩(wěn)定，通常選擇對免疫不重要的一端進行交聯(lián)。EDC活化載體上的-COOH，將載體的-COOH和多肽的-NH2連接起來也是一種可行的方法。但我們只建議在多肽序列中有多個Cys時采用該方法。如果肽鏈中含有多個-COOH或-NH2基因，不建議使用該方法，因為會造成多重點交聯(lián)的情況，使多肽結(jié)構(gòu)受影響。常用載體蛋白除KLH外，還有BSA，Ovalbumin等，造成KLH的優(yōu)勢是它不干擾ELISA或Western Blot等實驗。 5、對抗原多肽交聯(lián)合適的肽鏈長度 通常建議10-15個殘基進行交聯(lián)。肽鏈越長，抗體識別的區(qū)域越多，但也就越多機會形成穩(wěn)定的二級結(jié)構(gòu)。就不再是天然的形式了。太短的肽通常是沒有用的，除非有充足的理由，如與相關(guān)家族蛋白或其他蛋白有序列同源性等。 6、KLH交聯(lián)多肽溶液呈乳狀的原因 KLH是一個很大的并且聚合的蛋白。因為它的結(jié)構(gòu)和大小，它在水中的溶解度是很有限的，因此是乳狀，這并不影響它的免疫性，這種混濁的溶液可以直接免疫動物。 7、抗體的產(chǎn)量 抗體的產(chǎn)量取決于很多因素：識別區(qū)域的選擇，多肽的合成，載體的交聯(lián)，免疫的操作步驟和動物的生理系統(tǒng)等等，因此抗體的產(chǎn)量是不等的。5-25mg都屬于正常范圍。 原文地址：http://blog.sina.com.cn/s/blog_132fb62500102w03l.html |
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