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Valonia_

新蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 1191.9
帖子: 9
在線: 5小時(shí)
蟲號(hào): 3536325
注冊(cè): 2014-11-14
專業(yè): 污染生態(tài)學(xué)

[求助] 熒光定量pcr絕對(duì)定量構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒已有1人參與

構(gòu)建熒光定量pcr絕對(duì)定量的時(shí)候的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒時(shí)，連接轉(zhuǎn)化涂平板，經(jīng)過藍(lán)白斑篩選，挑選白斑擴(kuò)大培養(yǎng)，用新鮮菌液做模板，M13做引物進(jìn)行pcr檢測(cè)，條帶符合要求，但三個(gè)基因送出去測(cè)序后，在NCBI上VecSreen比對(duì)得到如下結(jié)果，不知道是什么原因，麻煩各位解答一下，謝謝。這是3個(gè)不同的基因。

1.PNG

熒光定量pcr絕對(duì)定量構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒-1

2.PNG

熒光定量pcr絕對(duì)定量構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒-2

3.PNG

回復(fù)此樓

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1樓 2015-12-31 13:37:04

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你是路人甲

銅蟲 (小有名氣)

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專業(yè): 微生物遺傳育種學(xué)

【答案】應(yīng)助回帖

PCR（Polymerasechain reaction，聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）是模擬體內(nèi)DNA復(fù)制過程，對(duì)特定DNA序列進(jìn)行大量擴(kuò)增的一種技術(shù)。 PCR反應(yīng)是以4種dNTP為底物，引物引導(dǎo)，DNA聚合酶催化作用下，在單鏈DNA模板3’末端開始進(jìn)行互補(bǔ)鏈的延伸，多次反復(fù)的擴(kuò)增使特定DNA序列以指數(shù)增加。我們實(shí)驗(yàn)室用BIOG 染料法熒光定量PCR和BIOG探針法熒光定量PCR測(cè)得的擴(kuò)增曲線起跳值一般在30左右，每經(jīng)過一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。

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回復(fù)此樓

2樓2019-12-16 11:06:11

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