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漂流瓶1991新蟲 (小有名氣)
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[交流]
農(nóng)桿菌PCR檢測問題 已有1人參與
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首先我的表達(dá)載體構(gòu)建分兩步：1.克隆啟動子，把啟動子連接到表達(dá)載體骨架上，得到一個帶有特點啟動子的表達(dá)載體骨架；2.克隆基因，把基因與帶有特點啟動子的表達(dá)載體連接好，構(gòu)建得到含有啟動子和基因的完整表達(dá)載體； 然后將構(gòu)建好的表達(dá)載體電轉(zhuǎn)農(nóng)桿菌；挑菌，菌液PCR分別檢測啟動子和基因； 出現(xiàn)的問題：每次農(nóng)桿菌菌液PCR檢測目的基因都能檢測到，但是啟動子卻什么都P不出來；拿構(gòu)建好的表達(dá)載體做模板能檢測到啟動子，而且之前懷疑構(gòu)建的表達(dá)載體有問題還特意測過序，測序結(jié)果表明載體沒有問題；請大家?guī)兔忉屢幌聻槭裁崔r(nóng)桿菌菌液PCR就是檢測不到啟動子呢？？難道電轉(zhuǎn)過程中就把啟動子丟了？我總共做了七八個，不至于每個都在電轉(zhuǎn)的時候把啟動子丟了吧？？急求幫助，不知道有沒有人遇到過同樣的問題，先在此謝過了！ |
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2樓2017-12-19 22:05:00
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