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柚小西新蟲 (初入文壇)
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[求助]
使表達盒在ITS序列的介導(dǎo)下重組到米曲霉基因中什么原理
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最近要合成一個complete cds的α-amylase全基因（GenBank號fj859877），在關(guān)于這個基因的相關(guān)title中發(fā)現(xiàn)這位作者是為了能夠?qū)一淀粉酶表達盒片段轉(zhuǎn)化到米曲霉中,構(gòu)建了重組載體pBC一hygro-ITS-amy,全長為10.4kb。重組載體中,a一淀粉酶表達盒序列連接到了ITS序列中間,形成了一條融合 序列,載體帶有HygromycinB磷酸轉(zhuǎn)移酶表達盒,可以用于篩選米曲霉轉(zhuǎn)化子。 我的問題是:為什么要將α-淀粉酶連接到ITS序列的中間，ITS序列不是鑒定菌種用的嗎？并且作者就是從米曲霉中克隆得到了α-淀粉酶表達盒的呢。這是什么原理呢？為了成功表達α-淀粉酶，一定要連接ITS序列融合嗎？我的宿主是畢赤酵母，表達載體也是酵母表達載體， 那我是否需要為了成功表達此基因，加α-淀粉酶連接上ITS序列呢？ 此基因在NCBI中http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/fj859877 顯示了信號肽和成熟肽，還有CDS，還有mRNA，我合成全基因是需要合成成熟肽序列就能成功表達了嗎（我的畢赤酵母載體上有信號肽序列）？這個基因有9個外顯子和8個內(nèi)含子，只需要合成外顯子就夠了嗎？ 多多指教呢。   |
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柚小西
新蟲 (初入文壇)
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2樓2016-01-05 14:31:11
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