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折光暗影新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助重疊延伸pcr
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本人最近在p一個基因的啟動子，長度2595，分成了兩段，分別是1285和1422，中間有100個bp的重疊，從基因組上把兩個片段擴下來的時候用的是hifi，進一步擴增的時候用的是fastpfu，兩個片段擴下來之后加上引物pcr連接的時候一直連不上，不加引物雖然可以連上，但是條帶很弱，用回收的目的條帶擴增的時候，第一次用hifi，退火溫度60的時候可以擴出來，第二次同樣的條件就不行了，求各位大俠解惑 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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