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zhfflying新蟲 (初入文壇)
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[求助]
引物設(shè)計(jì) 已有1人參與
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請大家?guī)兔纯�，這個(gè)引物是怎么了？設(shè)了好多次都不行，再這么下去老師的錢要被我花光了 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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原海亮
木蟲 (著名寫手)
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- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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不知道樓主想表達(dá)的主要問題是什么，以及pcr的目的，個(gè)人猜想:1，如果擴(kuò)增目的條帶做簡單克隆，那么圖里的問題又沒說明白，是完全沒有目的條帶？還是有目的條帶，但特異性不好？如果是前者，建議分析目的基因的GC含量是否過高，可調(diào)換GC buffer，另外退火溫度是最常見的問題；如果是后者，特異性不好原因很多，首先，樓主模板是基因組還是質(zhì)粒呢，如果基因組，存在非特異性條帶很正常，甚至有時(shí)候無法避免，對于簡單目的基因克隆來說，只要目的基因擴(kuò)增濃度夠，完全可以直接膠回收繼續(xù)下游實(shí)驗(yàn)；如果是質(zhì)粒，出現(xiàn)非特異性條帶主要就是退火溫度，可以嘗試溫度梯度摸索最適溫度！如果樓主pcr是篩選文庫，還是主要看有沒有目的條帶吧 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2016-01-10 22:01:38
zhfflying
新蟲 (初入文壇)
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3樓2016-01-15 10:38:27
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