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[求助]
是個小白，求助關于pcr，跑電泳，沒p出條帶，點樣孔會亮。 已有4人參與
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做5‘RACE PCR 提取植物的RNA后，用Smart試劑盒反轉錄出cDNA，以cDNA為模板，做pcr，沒p出條帶，點樣孔會亮，做了兩次pcr，兩次都出現(xiàn)這種情況 第一次做pcr的時候用了兩個模板，退火溫度是70與64，點樣孔沒亮；溫度是60與55，點樣孔會亮的。 第二次做pcr，希釋一個模板，做溫度梯度pcr，溫度設在63 61.4 58.9 56 53.5 51.9 51度，63度點樣孔沒亮，其他的都亮了，沒p出條帶。 其他師姐他們用同一個pcr儀可以p出條帶。 現(xiàn)在做這個實驗換了幾次試劑盒，再做下去老師的錢都被我用光了。 求個位大神幫幫忙忙 第二次pcr電泳圖 |
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4樓2016-01-11 11:17:45
奇怪人生123
銀蟲 (小有名氣)
- 應助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 457.4
- 帖子: 73
- 在線: 86.6小時
- 蟲號: 1037447
- 注冊: 2010-06-07
- 性別: GG
- 專業(yè): 臨床分子生物學檢驗
2樓2016-01-11 10:48:41
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myprayer: 金幣+1, 贈人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2016-01-12 20:42:07
myprayer: 金幣+1, 贈人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2016-01-12 20:42:07
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How was the quality of your RNA extracted? I think your PCR templates were rich in poly/oligosaccharides, polyphenols and other unknown sticky compounds that bind or co-precipitae with DNA and form a viscous complex. Such DNA sample is usually neither suitable for PCR amplification nor even possible to load into the electrophoresis well. |
3樓2016-01-11 10:59:15
5樓2016-01-11 11:23:07
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