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yly1991yd木蟲 (小有名氣)
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[求助]
Fluo 3/AM染色后怎么在流式細(xì)胞儀上檢測(cè)，求具體一點(diǎn)的步驟~
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小妹最近在做Fluo3/AM胞內(nèi)鈣離子染色，用普通的熒光顯微鏡觀察，也有很多問題。 具體步驟，用的是1mM的母液，含鈣鎂的hanks液將30微升母液稀釋到1mL，37度1h，室溫下20min左右，因?yàn)榕恼者�需要很久，所以有時(shí)候也不再室溫下孵，直接拍照的。之前按說明書的濃度1-5uM，感覺熒光很弱。 所以在這里求各位大神，有沒有具體的染色步驟，熒光到什么程度就算可以了呢~還有就是拍照的時(shí)候背景比較綠，開燈的話更加綠，所以我一直都關(guān)著燈拍。 老師最近說要做流式看看熒光，所以具體步驟我也不是很清楚，六孔板養(yǎng)，什么時(shí)候加藥，上機(jī)前怎么處理。 還有一個(gè)問題：我加了藥之后，藥物濃度高的明顯細(xì)胞少些，這樣的話細(xì)胞量不一樣我加了一樣的熒光探針，是不是沒什么意義，細(xì)胞少的就會(huì)比較亮一些，不能說明藥物的原因~目前感覺就是細(xì)胞少會(huì)亮一些 |
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