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sdjnyxn123

銀蟲 (小有名氣)

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[求助] 請(qǐng)問為什么有些表達(dá)載體的多克隆位點(diǎn)之間，有時(shí)會(huì)插入一個(gè)核苷酸，從而導(dǎo)致移碼？已有1人參與

比如這個(gè)pet32a的，為什么最后要在XHOI前面加個(gè)A呢，導(dǎo)致后面的his tag不能翻譯成his，而是pro，而且多了幾個(gè)氨基酸的大小才結(jié)束

直接到his tag后面的TGA結(jié)束不行嗎？

我換載體后，還是用之前引入酶切位點(diǎn)的目的基因進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，3'端沒有多加堿基，導(dǎo)致在his tag后面就直接結(jié)束了
請(qǐng)問會(huì)對(duì)表達(dá)有影響嗎？

請(qǐng)問為什么有些表達(dá)載體的多克隆位點(diǎn)之間，有時(shí)會(huì)插入一個(gè)核苷酸，從而導(dǎo)致移碼？-1

我看這個(gè)pet32還有b和c系列的，就是多一個(gè)或者少一個(gè)核苷酸，導(dǎo)致在最后的結(jié)束位點(diǎn)這里有所不同
所以還想問一個(gè)問題，它這樣設(shè)計(jì)的目的是什么呢？

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1樓 2016-01-11 11:22:29

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hanxiaominhu

至尊木蟲 (著名寫手)

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【答案】應(yīng)助回帖

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標(biāo)簽是否移碼是要看起始密碼子的位置和插入片段的長短決定的，酶切位點(diǎn)之間的堿基是專門插入的。abc三個(gè)質(zhì)粒是為了方便不同長度的目的片段插入的。一般你已經(jīng)有目的片段的時(shí)候，選擇abc中那個(gè)不會(huì)造成移碼的。不知道我說明白沒。

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2樓2016-01-11 11:47:08

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