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[求助]
絲狀真菌黑曲霉轉(zhuǎn)化求助 已有2人參與
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我是做基因異源表達(dá)的，宿主用的是黑曲霉，表達(dá)載體用的pBARGPE1，轉(zhuǎn)化采用的是PEG法，做了很長(zhǎng)時(shí)間了，一直轉(zhuǎn)不進(jìn)去，抗性篩選用的草銨膦，參考文獻(xiàn)里的濃度一般在200~300mg/L左右，我買(mǎi)的進(jìn)口分裝的原藥，濃度已經(jīng)到1200mg/L了，黑曲霉依然生長(zhǎng)，現(xiàn)在搞不清楚是哪里的問(wèn)題，不知道各位蟲(chóng)友有沒(méi)有這方面的經(jīng)驗(yàn)，給點(diǎn)寶貴的建議，萬(wàn)分感謝！ 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
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銀蟲(chóng) (小有名氣)
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- 專業(yè): 臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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我之前是做灰綠曲霉的，也要做PEG介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化，然后用博來(lái)霉素篩選。 首先你得確定一下，草銨膦是否對(duì)你實(shí)驗(yàn)室中黑曲霉的野生株真的有效，在此基礎(chǔ)上才能繼續(xù)進(jìn)行。 當(dāng)然，也有可能是培養(yǎng)基中的某些成分會(huì)阻礙草銨膦發(fā)揮作用，我用的博來(lái)霉素就是怕光、怕過(guò)酸、怕過(guò)堿、怕鹽離子，所以用的時(shí)候需要非常注意，建議查一下草銨膦的說(shuō)明書(shū)或者原理。 |
2樓2016-01-15 16:26:26
3樓2020-03-20 17:00:40
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