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[求助]
把質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到JM109測序結(jié)果不會分析，要看一下目的基因有沒有His6尾巴 已有2人參與
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| 測序結(jié)果拿回來了，完全不知道該怎么分析~~有沒有大神可以指導(dǎo)一下呢~~一份是測序的圖譜，一份是該質(zhì)粒載體PJ401的序列，導(dǎo)師說要注意基因界限的問題，分析了半天就只會用DNAMAN簡單看看基本組成什么的，深了實在不懂，現(xiàn)在當(dāng)務(wù)之急是看一下，我的序列有沒有His6尾巴~~因為我現(xiàn)在做提純純化不出來~~希望大神幫幫我~~我做的是木聚糖酶的相關(guān)課題~~ |
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2016-01-17 12:05:19, 16.3 K
2016-01-17 12:05:21, 276.85 K
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2樓2016-01-17 12:10:23
原海亮
木蟲 (著名寫手)
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西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2016-01-18 22:58:59
西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2016-01-18 22:58:59
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你目的基因的序列沒有么？拿來和測序結(jié)果比對一下，確認(rèn)目的基因的正確性，從ATG到TGA（也可能其他終止密碼子），然后根據(jù)你設(shè)計的酶切位點來看HIS標(biāo)簽的位置，然后在你目的基因的位置往前或后面看看是否有標(biāo)簽。因為標(biāo)簽是載體自身帶的，如果你酶切位點沒有問題，測序結(jié)果也顯示有目的基因插入，那么標(biāo)簽一般不是丟失的。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2016-01-17 16:07:15
4樓2016-01-17 17:19:23
ps499250429
新蟲 (正式寫手)
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5樓2016-01-18 08:26:44
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2016-01-18 22:59:28
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2016-01-18 22:59:28
| 測序結(jié)果分析主要就是先確定測序結(jié)果的可靠性，如果需要拼接，比對時發(fā)現(xiàn)突變點就去看峰值圖，如果峰值很好認(rèn)為測序可靠，發(fā)生突變，如果峰值很雜，就不用擔(dān)心，從新選定位置重新測序。然后就要看融合情況，即使發(fā)生點突變也不要直接放棄，因為密碼子的簡并性，有可能你的蛋白并沒有變化。查找你的融合位置的第一個起始密碼子，刪掉前面的序列，直接進(jìn)行翻譯，看是否有提前終止情況。如果沒有提前終止，就可以將之與已知蛋白序列比對，看看是否有突變。 |
6樓2016-01-18 16:15:33
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
張小蛋: 金幣+10, ★★★★★最佳答案 2016-01-18 20:50:05
張小蛋: 金幣+10, ★★★★★最佳答案 2016-01-18 20:50:05
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MTIQPGTGYNNGYFYSYWNDGHGGVTYTNGPGGQFSVNWSNSGNFVGGKGWQPGTKNKVINFSGSYNPNGNSYLSVYGWSRNPLIEYYIVENFGTYNPSTGATKLGEVTSDGSVYDIYRTQRVNQPSIIGTATFYQYWSVRRNHRSSGSVNTANHFNAWAQQGLTLGTMDYQIVAVEGYFSSGSASITVS.LEPQGRHPLISPGERPSLSTEPFVLFDAWQFPTLAWGVPTLPSALRRFTSEFGMGSGGTTALLPPGKQRVL.AIFRYKWARDNVQNWLIGCNTDPYLLIF.IHSNMYPLMRHNPDKCFIILKRRI. 這是將你的序列從RBS后面第一個起始密碼子開始翻譯的氨基酸序列，在第190個氨基酸后出現(xiàn)終止密碼子 你看看是不是你的全場融合蛋白 |
7樓2016-01-18 16:37:17
8樓2016-01-18 20:49:35
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