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daijiguo新蟲 (初入文壇)
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[求助]
培養(yǎng)原代心肌細(xì)胞過程培養(yǎng)液出現(xiàn)渾濁 求助 已有1人參與
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做原代心肌細(xì)胞分離培養(yǎng)，已經(jīng)做過好幾次。貼壁24h換液，然后72h再換液，第四天進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 做了大概5、6次后，24h換液后觀察細(xì)胞已經(jīng)貼壁，可見波動(dòng)，再培養(yǎng)一晚上，也就是第3天 培養(yǎng)液變渾濁，鏡下呈”彌沙狀”。細(xì)胞狀態(tài)  差，細(xì)胞很瘦。自己尋找原因： 1、剛開始我以為是感染，將培養(yǎng)箱75%酒精擦了兩遍，紫外燈照射一晚上大于12h，同時(shí)培養(yǎng)箱中的隔層在超凈臺(tái)紫外燈下照射一晚上，同時(shí)水換新消水。然后將前面用的離心管、PBS等全部換新。 重復(fù)分離過程，至第3天，依然出現(xiàn)培養(yǎng)液變渾濁，鏡下呈”彌沙狀”。找尋老師來觀察，未見感染微生物。 2、 配方?jīng)]有問題。我的培養(yǎng)液配方是：體積50ml（FBS 5ml+MEM 500ul+PS 500ml+L-G 500ml（都是sigma的），其他高糖補(bǔ)足）。這次將已經(jīng)打開了得那瓶高糖DMEM（hyclone）換了一瓶新的，同時(shí)在鏡下觀察添加劑未見感染。 3、以為是加了L-G才會(huì)變化，前面我用了一點(diǎn)以前的L-G，是一直凍在-20℃的，于是配了含L-G和不含L-G的兩種培養(yǎng)液給細(xì)胞換液，結(jié)果還是第3天 培養(yǎng)液變渾濁，鏡下呈”彌沙狀”。細(xì)胞狀態(tài)差，細(xì)胞很瘦。所以不是添加了舊的L-G的問題。 4、培養(yǎng)箱會(huì)出現(xiàn)CO2 波動(dòng)，5%-7%這樣波動(dòng)，于是換了另一個(gè)穩(wěn)定5%培養(yǎng)箱 。 結(jié)果還是培養(yǎng)液變渾濁，鏡下呈”彌沙狀” 。所以不是培養(yǎng)箱co2波動(dòng)問題。5、后經(jīng)過詢問師姐，說可能是營(yíng)養(yǎng)不夠。彌沙是細(xì)胞代謝產(chǎn)物和細(xì)胞死亡了。于是將FBS+10ml ，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行換液，培養(yǎng)一晚上，觀察培養(yǎng)液仍渾濁。所以不是營(yíng)養(yǎng)不夠。 6、培養(yǎng)液PH的問題，測(cè)定了D-HANKES液，PH是7.4。高糖培養(yǎng)液也是正常顏色（含酚紅）。 所以又排出了PH不適的問題 求各位做過原代心肌細(xì)胞分離培養(yǎng)的大神們，給予建議。。。我該怎么辦，接下來怎么找原因。萬分感謝啊啊 啊啊 |
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