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會飛的魚622新蟲 (初入文壇)
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[求助]
假單胞菌 基因敲除 雙交換 突變菌株的獲得
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各位大俠請求幫助 我做的是假單胞菌羧卞抗性的基因敲除試驗(yàn)，選用的自殺質(zhì)粒是PJQ200sk gent抗性，將基因的ATG上下游500-600bp片段擴(kuò)增出來，在ATG下游20bp左右插入卡那霉素抗性基因，然后連入PJQ200sk 1.進(jìn)行三親雜交，在卡那霉素和羧卞的平板上長斑，pcr驗(yàn)證能夠檢測到突變后基因大小的片段，但是擴(kuò)增不出來假單胞菌其他的基因，蔗糖篩選后也一樣 2.進(jìn)行電轉(zhuǎn)，在卡那霉素和羧卞的平板上長斑，菌液pcr目的基因和其他基因都擴(kuò)增不到，能再蔗糖板上張，也能在gent抗性的培養(yǎng)基中張 各位大俠幫幫忙 |
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