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小芭啦金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
用于線蟲(chóng)的質(zhì)粒能轉(zhuǎn)染細(xì)胞嗎？ 已有3人參與
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本人手上有帶有目的基因的質(zhì)粒，但這個(gè)質(zhì)粒是做線蟲(chóng)的同學(xué)好心給的，質(zhì)粒信息如下： 啟動(dòng)子是Punc-25，是C-elegans unc-25基因的啟動(dòng)子（這個(gè)基因表達(dá)于線蟲(chóng)GABA運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元） 還有一個(gè)unc-54 3’ UTR，位于目的基因下游，應(yīng)該是終止密碼子吧？ 導(dǎo)師說(shuō)用這個(gè)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染哺乳動(dòng)物細(xì)胞，想問(wèn)問(wèn)各位能用嗎？我查到質(zhì)粒構(gòu)建的時(shí)候要篩選適合宿主細(xì)胞表達(dá)的強(qiáng)啟動(dòng)子和較好的終止子，這樣才有助于目的基因的大量表達(dá)，好像哺乳動(dòng)物啟動(dòng)子CMV，SV-40這些是比較好的嗎？ 新手一枚，分子生物方面完全是個(gè)門(mén)外漢，請(qǐng)求各位蟲(chóng)友幫助，問(wèn)題可能有點(diǎn)傻，求高手勿噴 |
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xufengnbu
木蟲(chóng) (小有名氣)
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先做看看，萬(wàn)一有結(jié)果不是很好嗎 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
2樓2016-01-22 08:03:38
小芭啦
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3樓2016-01-24 20:10:54
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4樓2016-02-22 16:03:17
【答案】應(yīng)助回帖
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小芭啦: 金幣+90, ★★★★★最佳答案, 感謝感謝 2016-02-23 08:15:08
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| 不知道能不能表達(dá)，很大程度是不能表達(dá)的，此外3'UTR是 非翻譯區(qū)，含有終止密碼子以及協(xié)助終止的信號(hào)序列。你可以將目的基因插入到含有CMV啟動(dòng)子的載體中，這樣表達(dá)量就會(huì)很高；SV40啟動(dòng)子沒(méi)有CMV啟動(dòng)子活性強(qiáng)，一般是在檢測(cè)系統(tǒng)中用到。 |
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小芭啦5樓2016-02-22 16:09:01
小芭啦
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6樓2016-02-23 08:13:59
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