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destiny516新蟲 (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于藥典中蘄蛇PCR的問題 已有1人參與
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模板DNA提取 取本品0.5g，置乳缽中，加液氮適量，充分研磨使成粉末，取0.1g，置1.5ml離心管中，加入消化液275μl[細(xì)胞核裂解液200μl，0.5mol/L乙二胺四醋酸二鈉溶液50μl，蛋白酶K（20mg/ml）20μl，RNA酶溶液5μl]，在55℃水浴保溫1小時(shí)，加入裂解緩沖液250μl，混勻，加到DNA純化柱中，離心（轉(zhuǎn)速為每分鐘10000轉(zhuǎn)）3分鐘；棄去過濾液，加入洗脫液800μl[5mol/L醋酸鉀溶液26μl，1mol/L Tris-鹽酸溶液（pH7.5）18μl，0.5mol/L乙二胺四醋酸二鈉溶液（pH8.0）3μ1，無水乙醇480μl，滅菌雙蒸水273μl]，離心（轉(zhuǎn)速為每分鐘10000轉(zhuǎn)）1分鐘；棄去過濾液，用上述洗脫液反復(fù)洗脫3次，每次離心（轉(zhuǎn)速為每分鐘10000轉(zhuǎn)）1分鐘；棄去過濾液，再離心2分鐘，將DNA純化柱轉(zhuǎn)移入另一離心管中，加入無菌雙蒸水100μl，室溫放置2分鐘后，離心（轉(zhuǎn)速為每分鐘10000轉(zhuǎn)）2分鐘，取上清液，作為供試品溶液，置零下20℃保存?zhèn)溆�。另取蘄蛇對(duì)照藥材0.5g，同法制成對(duì)照藥材模板DNA溶液。 以上為15版藥典中規(guī)定的蘄蛇DNA提取的方法，可是未明確細(xì)胞核裂解液和裂解緩沖液的配制方法，求各位大神告知細(xì)胞核裂解液和裂解緩沖液的配方？？萬分感謝 |
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leisure797
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百里登風(fēng)
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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裂解液和細(xì)胞裂解液配制 http://wenku.baidu.com/link?url= ... QUOpRoFo73Ua5Q60UZa |
2樓2016-01-29 15:43:38
destiny516
新蟲 (初入文壇)
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- 專業(yè): 中藥鑒定
3樓2016-02-01 09:36:10
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