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redking2012木蟲(chóng) (正式寫手)
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[交流]
熒光蛋白報(bào)告基因在基因組編輯中的作用
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最近在想一個(gè)問(wèn)題關(guān)于怎么更加高效的使用熒光蛋白報(bào)告基因來(lái)更快的篩選出編輯正確的細(xì)胞。通常我們?cè)诩?xì)胞內(nèi)過(guò)表達(dá)zinc finger或者talen 和crispr cas9，以及靶標(biāo)導(dǎo)向的元件，通常我們可以給細(xì)胞提供一個(gè)供體質(zhì)粒：帶有兩個(gè)同源臂，同源臂上帶有想要引入的突變，同源臂之間帶有熒光蛋白標(biāo)簽。通過(guò)同源臂重組，突變被引入基因組，同時(shí)熒光蛋白報(bào)告基因也被引入基因組，通過(guò)流式細(xì)胞篩選帶有熒光的單細(xì)胞，這種方法可以快速富集編輯成功的細(xì)胞。那么我們可不可以同時(shí)構(gòu)建兩個(gè)供體質(zhì)粒，分別帶有不同熒光，流式細(xì)胞篩選帶有兩種熒光的細(xì)胞，這種細(xì)胞理論上應(yīng)該是兩個(gè)拷貝都被成功的編輯了。 另外我想問(wèn)問(wèn)大家，過(guò)多的熒光篩選對(duì)細(xì)胞有什么傷害，這種篩選出來(lái)的細(xì)胞發(fā)表論文的時(shí)候，審稿人會(huì)不會(huì)懷疑該方法的安全性？ 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
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