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redking2012木蟲 (正式寫手)
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熒光蛋白報(bào)告基因在基因組編輯中的作用 已有1人參與
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最近在想一個(gè)問題關(guān)于怎么更加高效的使用熒光蛋白報(bào)告基因來更快的篩選出編輯正確的細(xì)胞。通常我們在細(xì)胞內(nèi)過表達(dá)zinc finger或者talen 和crispr cas9,以及靶標(biāo)導(dǎo)向的元件,通常我們可以給細(xì)胞提供一個(gè)供體質(zhì)粒:帶有兩個(gè)同源臂,同源臂上帶有想要引入的突變,同源臂之間帶有熒光蛋白標(biāo)簽。通過同源臂重組,突變被引入基因組,同時(shí)熒光蛋白報(bào)告基因也被引入基因組,通過流式細(xì)胞篩選帶有熒光的單細(xì)胞,這種方法可以快速富集編輯成功的細(xì)胞。那么我們可不可以同時(shí)構(gòu)建兩個(gè)供體質(zhì)粒,分別帶有不同熒光,流式細(xì)胞篩選帶有兩種熒光的細(xì)胞,這種細(xì)胞理論上應(yīng)該是兩個(gè)拷貝都被成功的編輯了。 另外我想問問大家,過多的熒光篩選對細(xì)胞有什么傷害,這種篩選出來的細(xì)胞發(fā)表論文的時(shí)候,審稿人會(huì)不會(huì)懷疑該方法的安全性? 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
木蟲 (正式寫手)

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