 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 24846 | 回復(fù): 137 | ||||||||||
| 【獎(jiǎng)勵(lì)】 本帖被評(píng)價(jià)112次，作者風(fēng)之惑增加金幣 80.05 個(gè) | ||||||||||
| 當(dāng)前只顯示滿(mǎn)足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||||||||||
風(fēng)之惑鐵桿木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
|
[資源]
跑柱經(jīng)驗(yàn)分享（轉(zhuǎn)帖+個(gè)人經(jīng)驗(yàn)）
|
|||||||||
|
比較基礎(chǔ)，適合新蟲(chóng)學(xué)習(xí)！ 一、裝柱 裝柱子（添硅膠）時(shí)，常用的有兩種方法：即濕法裝柱和干法裝柱，二者各有優(yōu)劣。 不論干法還是濕法，硅膠（稱(chēng)為固定相更為廣義）的上表面一定要平整，并且硅膠（固定相）的高度一般為15cm左右（長(zhǎng)度沒(méi)有絕對(duì)之說(shuō)，根據(jù)自身情況而定，制備的大柱可以長(zhǎng)達(dá)一米），太短了可能分離效果不好，太長(zhǎng)了也會(huì)由于擴(kuò)散或拖尾導(dǎo)致分離效果不好。 濕法裝柱是先把硅膠用適當(dāng)?shù)娜軇┌鑴蚝�，再填入柱子中，然后再加壓�?font color="Red" class="Red_ext">土方法可以用養(yǎng)魚(yú)的氧氣泵加壓或是用氮?dú)�，�?dāng)然不加壓也可以）用淋洗劑"走柱子"，本法最大的優(yōu)點(diǎn)是一般柱子裝的比較結(jié)實(shí)，沒(méi)有氣泡。 （我一般都用濕法裝柱） 干法裝柱則是直接往柱子里填入硅膠，然后再輕輕敲打柱子兩側(cè)（濕法也要敲的，效果好點(diǎn)），至硅膠界面不再下降為止，然后再填入硅膠至合適高度，最后再用油泵直接抽，這樣就會(huì)使得柱子裝的很結(jié)實(shí)（一般柱子不敢用油泵抽，怕把柱子抽裂了）。接著是用淋洗劑"走柱子"，一般淋洗劑是采用TLC分析得到的展開(kāi)劑的比例再稀釋一倍后的溶劑。通常上面加壓，下面再用油泵抽，這樣可以加快速度。干法裝柱較方便，但最大的缺陷在于"走柱子"時(shí)，由于溶劑和硅膠之間的吸附放熱（可以用手摸柱子明顯感覺(jué)到）（梯度洗脫時(shí)，濕法裝柱也會(huì)出現(xiàn)該情況，比較不好處理，可以緩慢改變?nèi)軇�，且置于通風(fēng)處），容易產(chǎn)生氣泡，這一點(diǎn)在使用低沸點(diǎn)的淋洗劑時(shí)如乙醚（用乙醚最最明顯），二氯甲烷更為明顯。雖然產(chǎn)生的氣泡在加壓的情況下不易察覺(jué)，但是，一旦撤去壓力，如在上樣、加溶劑等操作的時(shí)候，氣泡就會(huì)釋放出來(lái)，嚴(yán)重時(shí)，整個(gè)柱子變花，樣品不可能平整地通過(guò)，當(dāng)然也就談不上分離了。 解決的辦法是： 第一、硅膠一定要壓結(jié)實(shí)； 第二、 一定要用較多的溶劑"走柱子"，一定要到柱子的下端不再發(fā)燙，恢復(fù)到室溫后再撤去壓力。 也有介紹在硅膠的最上層填上一小層石英砂(我一般墊張濾紙，撒上石英砂，再放些棉花)，防止添加溶劑的時(shí)候，使得樣品層不再整齊。但我的感覺(jué)是如果小心上樣，添加溶劑，則沒(méi)有這個(gè)必要。 二、上樣 上樣也有干法和濕法之分： 干法（也稱(chēng)硅膠制沙）就是把待分離的樣品用少量溶劑溶解后，在加入少量硅膠，拌勻后再旋去溶劑。如此得到的粉末再小心加到柱子的頂層。干法上樣較麻煩，但可以保證樣品層很平整。（我一般喜歡用這種方法，除非不能用） 濕法上樣就是用少量溶劑（最好就是展開(kāi)劑，如果展開(kāi)劑的溶解度不好，則可以用一極性較大的溶劑，但必須少量）將樣品溶解后，再用膠頭滴管轉(zhuǎn)移得到的溶液，沿著層析柱內(nèi)壁均勻加入。然后用少量溶劑洗滌后，再加入。 濕法較方便，但不溶劑讓其完全被硅膠均勻吸附，不容易跑的很平整 柱層析關(guān)鍵在于柱子是否裝好（這是最大影響因素）和淋洗劑是否選擇恰當(dāng)。而淋洗劑的選擇則是通過(guò)TLC確定。這里要指出的一點(diǎn)是：TLC（作用還是很大的）的作用除了跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，檢測(cè)試劑和原料純度外，一個(gè)重要的用途就是為柱層析選擇適當(dāng)?shù)牧芟磩?br /> 上樣完畢后，接著即用淋洗劑淋洗。淋洗劑一般采用TLC分析得到的展開(kāi)劑的比例再稀釋一倍后的溶劑。由于層析柱和薄板的不同，即使兩者使 用的硅膠都相同，但是在把TLC分析得到的展開(kāi)劑用在柱層析時(shí)，也顯得極性偏大，所以要稀釋一倍，但又不能稀釋太多，否則成了靠擴(kuò)散作用來(lái)分離，效果也不會(huì)好。（這一點(diǎn)很實(shí)用，不過(guò)有些特殊情況也不一定，如果要保險(xiǎn)可以先做根小柱子跑一下，這樣最安全，就是花點(diǎn)時(shí)間） 三、收集 主要依靠TLC（據(jù)說(shuō)國(guó)外有石英柱，直接用熒光燈照能看出來(lái)，不過(guò)太貴了，在國(guó)內(nèi)不一定適用），需要切記的是： 第一、某種樣品在這種展開(kāi)劑中只顯示一個(gè)點(diǎn)，并不等于在別的展開(kāi)劑中也只顯示一個(gè)點(diǎn)。因此在尋找展開(kāi)劑時(shí)，多嘗試幾種比例不同，成分不同的展開(kāi)劑。展開(kāi)劑的極性太小，點(diǎn)分不開(kāi)，極性太大，也分不開(kāi).一般以目標(biāo)產(chǎn)物的Rf值在0.3左右為最佳。 第二、點(diǎn)不能點(diǎn)得太濃（在最后時(shí)應(yīng)該點(diǎn)的濃點(diǎn)，這樣看看有無(wú)收盡產(chǎn)品）,否則容易重疊,不易判斷,因?yàn)槿绻麅蓚�(gè)點(diǎn)相近的話,一濃就變成一個(gè)點(diǎn)了。 第三、板上點(diǎn)的展開(kāi)的清晰程度和溶劑的極性和物質(zhì)在該溶劑中的溶解性有關(guān)，只有兩者比較合適才能有一個(gè)交好的分離效果。 選擇適當(dāng)?shù)恼归_(kāi)劑是首要任務(wù).一般常用溶劑按照極性從小到大的順序排列大概為：石油迷<己烷<苯<乙醚 展開(kāi)劑的比例要靠嘗試. 一般根據(jù)文獻(xiàn)（這是首選）中報(bào)道的該類(lèi)化合物用什么樣的展開(kāi)劑，就首先嘗試使用該類(lèi)展開(kāi)劑，然后不斷嘗試比例，直到找到一個(gè)分離效果好的展開(kāi)劑。 很多時(shí)候,展開(kāi)劑的選擇要靠自己不斷變換展開(kāi)劑的組成來(lái)達(dá)到最佳效果。不行可以嘗試兩兩混合，三者混合，一般把兩種溶劑混合時(shí),采用高極性/低極性的體積比為1/3的混合溶劑,如果有分開(kāi)的跡象,再調(diào)整比例,達(dá)到最佳效果，如果沒(méi)有分開(kāi)的跡象，最好是換溶劑。 在利用TLC跟蹤反應(yīng)時(shí)，在點(diǎn)板的時(shí)候往往是反應(yīng)體系的混和溶液點(diǎn)一個(gè)點(diǎn)A，每種難揮發(fā)的原料各點(diǎn)一個(gè)點(diǎn)B,C, D等等，然后所有的原料和反應(yīng)體系的混合溶劑再共同點(diǎn) 一個(gè)混合點(diǎn)X，這些點(diǎn)在板上的位置如圖所示： A X B C D 這樣的好處是展開(kāi)后可以清楚地看見(jiàn)每個(gè)點(diǎn)的位置，把A這個(gè)點(diǎn)展開(kāi)后的各個(gè)層份的 點(diǎn)與B,C,等原料比較，從而判斷原料消失沒(méi)有，點(diǎn)混合點(diǎn)X的目的在于，方便觀察，因?yàn)橛袝r(shí)候，板展開(kāi)后，各點(diǎn)的位置有些變形，或者由于邊緣效應(yīng)等等，使得判斷不易。（我喜歡用小板，跑的快，很快見(jiàn)到結(jié)果，為了避免小板的邊緣，用機(jī)器板較好） 利用TLC判斷物質(zhì)的純度時(shí)，如果不能完全確定，可以再結(jié)合其他檢測(cè)手段，如NMR，因?yàn)槟撤N樣品在這種展開(kāi)劑中只顯示一個(gè)點(diǎn)，并不等于在別的展開(kāi)劑中也只顯示一個(gè)點(diǎn)。 但有趣的是，由于H-NMR可鑒別 的純度也就在95%左右，有時(shí)候H NMR現(xiàn)示較純的東西，一點(diǎn)板就會(huì)發(fā)現(xiàn)有幾個(gè)點(diǎn)。所以，兩者要結(jié)合使用。如果有標(biāo)準(zhǔn)品或是以前做過(guò)的，對(duì)個(gè)對(duì)照最方便。 [ Last edited by 風(fēng)之惑 on 2008-10-7 at 12:09 ] |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專(zhuān)輯推薦
 藥分、天藥資料收藏 | 天然產(chǎn)物 | 經(jīng)典典藏 | 天然產(chǎn)物分離 |
| 高分子檢測(cè) | 經(jīng)驗(yàn)啊經(jīng)驗(yàn) | 實(shí)踐出真知 labwork | 好資料 |
» 猜你喜歡
303求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
有沒(méi)有道鐵/土木的想調(diào)劑南林，給自己招師弟中～
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
梁成偉老師課題組歡迎你的加入
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
一志愿蘇州大學(xué)材料工程（085601）專(zhuān)碩有科研經(jīng)歷三項(xiàng)國(guó)獎(jiǎng)兩個(gè)實(shí)用型專(zhuān)利一項(xiàng)省級(jí)立項(xiàng)
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
070300化學(xué)319求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
一志愿天津大學(xué)化學(xué)工藝專(zhuān)業(yè)（081702）315分求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
268求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
290求調(diào)劑
已經(jīng)有11人回復(fù)
-
材料與化工求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
293求調(diào)劑
已經(jīng)有11人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- J1 check 沈陽(yáng) 經(jīng)驗(yàn)分享
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 【工程師版】工程師經(jīng)驗(yàn)分享匯總（-2011年12月19日）
已經(jīng)有579人回復(fù)
- 公派加拿大經(jīng)驗(yàn)分享
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 奧地利簽證經(jīng)驗(yàn)分享
已經(jīng)有8人回復(fù)
- 【經(jīng)驗(yàn)分享】J1+J2
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【經(jīng)驗(yàn)分享】終于把442申請(qǐng)寄出去了，小結(jié)一下！
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【經(jīng)驗(yàn)分享】補(bǔ)充材料后收到如此回復(fù)！
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 【資源】【分享】色譜柱使用時(shí)需要注意的幾點(diǎn)經(jīng)驗(yàn)分享
已經(jīng)有7人回復(fù)
3樓2008-10-07 15:42:58
jimmyt
鐵桿木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 2583.8
- 帖子: 982
- 在線: 414.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 503387
2樓2008-10-07 14:06:42
4樓2008-10-07 20:55:05
yulaizai2000
金蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 617.1
- 帖子: 219
- 在線: 91.5小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 421675
6樓2008-10-08 08:53:25
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 有沒(méi)有道鐵/土木的想調(diào)劑南林，給自己招師弟中～ +3 | TqlXswl 2026-03-16 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 材料與化工專(zhuān)碩調(diào)劑 +5 | heming3743 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085601材料工程專(zhuān)碩求調(diào)劑 +3 | 慕寒mio 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +6 | 步川酷紫123 2026-03-11 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +3 | A_JiXing 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 070303 總分349求調(diào)劑 +3 | LJY9966 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 277材料科學(xué)與工程080500求調(diào)劑 +3 | 自由煎餅果子 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 070305求調(diào)劑 +3 | mlpqaz03 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 080500，材料學(xué)碩302分求調(diào)劑學(xué)校 +4 | 初識(shí)可樂(lè) 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿哈工大材料324分求調(diào)劑 +5 | 閆旭東 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿中科院，化學(xué)方向，295求調(diào)劑 +4 | 一氧二氮 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +5 | 是Lupa啊 2026-03-11 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿西南交大，材料專(zhuān)碩317求調(diào)劑 +5 | lx8568 2026-03-11 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +3 | 冬十三 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料與化工085600調(diào)劑求老師收留 +9 | jiaanl 2026-03-11 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 307求調(diào)劑 +5 | 超級(jí)伊昂大王 2026-03-12 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿山大07化學(xué) 332分 四六級(jí)已過(guò) 本科山東雙非 求調(diào)劑！ +3 | 不想理你 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0856化學(xué)工程280分求調(diào)劑 +4 | shenzxsn 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0856化工原理 +6 | z2839474511 2026-03-10 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | 崔wj 2026-03-12 | 4/200 |
|