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philoqi新蟲(chóng) (小有名氣)
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PCR擴(kuò)增做的好好的，突然擴(kuò)增不出來(lái)了，什么原因？
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PCR擴(kuò)增做的好好的，一直很穩(wěn)定，突然擴(kuò)增不出來(lái)了，見(jiàn)圖片1。后來(lái)?yè)Q了機(jī)器，也是擴(kuò)增不出來(lái)。前幾天擴(kuò)增出的也擴(kuò)不出來(lái)了。重新溶解干粉引物也不行，引物有半年了，-20度保存。又把兩個(gè)樣本同時(shí)用兩種引物做PCR，這種還是擴(kuò)增不出，另一種引物可以擴(kuò)增見(jiàn)圖2。這兩天擴(kuò)增條帶很暗，見(jiàn)圖3，條件沒(méi)有變，不知道什么原因？DNA應(yīng)該沒(méi)問(wèn)題，是什么原因呢？ QQ圖片1.jpg 圖片2.png 圖片3.png |
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2樓2016-01-31 18:57:14
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philoqi: 金幣+50, 博學(xué)EPI+1, ★★★很有幫助 2016-02-19 15:33:31
philoqi: 金幣+50, 博學(xué)EPI+1, ★★★很有幫助 2016-02-19 15:33:31
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這種情況下就需要做個(gè)陽(yáng)性控制看看。 原因幾種可能，逐個(gè)排除： 1、酶，酶保存溫度是不是低溫-20？這個(gè)跟酶的質(zhì)量有關(guān)。 2、引物，如果重新溶都沒(méi)問(wèn)題就可以排除了 3、試劑buffer。有些試劑會(huì)析出，你查看下是不是濃度已經(jīng)變化了，如果排除上面的問(wèn)題就重新配制試試。 |
3樓2016-02-07 12:16:23
philoqi
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4樓2016-02-07 18:52:30
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5樓2016-02-09 08:01:36
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我也經(jīng)常做這個(gè)，好像沒(méi)出現(xiàn)過(guò)這樣的問(wèn)題，我沒(méi)出來(lái)結(jié)果要么是基因沒(méi)提取出來(lái)，要么是試劑問(wèn)題 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
6樓2016-02-09 19:47:51
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