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lys6827木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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[交流]
DNA片段的熔解曲線問(wèn)題
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新蟲(chóng) (小有名氣)
| 溶解曲線制作過(guò)程中當(dāng)解開(kāi)到一半的時(shí)候,并不是熒光信號(hào)值達(dá)到最大,而是熒光信號(hào)的變化率。你所看到的是一次微分后的融解曲線結(jié)果。而原始的融解曲線是隨著60℃起始升高溫度的過(guò)程,雙鏈緩慢解鏈,嵌入在DNA雙鏈中的SYBR Green I數(shù)量減少,熒光信號(hào)強(qiáng)度逐漸降低,當(dāng)溫度達(dá)到Tm值時(shí),熒光信號(hào)值驟然降低,而此時(shí)的熒光信號(hào)的變化率是最大的,即對(duì)應(yīng)一次微分結(jié)果的峰值。 |
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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我上面附的圖是原始圖呀。 我是想問(wèn),比如上圖,原始的熒光信號(hào)在60度時(shí)是11左右,而到達(dá)Tm值(83.26)不是5.5,實(shí)際上是2左右?這是為什么? 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
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