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關(guān)于刪除編碼序列中ER 的HDEL作用 已有1人參與
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| 最近讀了一篇文章，文中在煙草葉片中進(jìn)行亞細(xì)胞共定位時，作者把內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的hdel刪除了，接著做了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的熒光蛋白定位 ， 我很想知道刪除hdel這一步是為什么， 是不是hdel會對含有信號肽的定位產(chǎn)生影響？ |
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3樓2016-11-20 21:13:44
starseacow
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【答案】應(yīng)助回帖
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kuaile5420: 金幣+1, 歡迎發(fā)帖交流 2016-11-23 20:51:13
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回答這個問題，你需要了解的是為什么在熒光蛋白上連接HDEL。 首先，熒光蛋白如GFP本身，在細(xì)胞中表達(dá)會顯示彌散在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，沒有特定表達(dá)位置。為了讓熒光蛋白位于特定亞細(xì)胞位置，借鑒動物細(xì)胞研究的方法，首先在GFP上連接來自馬鈴薯塊莖儲存蛋白上的一個23個氨基酸長肽段 patatin使得GFP會被導(dǎo)向ER。接下來為了讓 patatin-GFP能夠一直留在ER內(nèi)，又將KDEL及長春HSP90同系蛋白C端的七個氨基酸連在GFP的C端，這樣形成的patatin-GFP-KDEL將一直在ER中。HDEL起類似作用。 一般來說刪去HDEL，主要是在traffic研究中。patatin-GFP會從ER通過指向PM的轉(zhuǎn)運(yùn)途徑運(yùn)出胞外，這樣的熒光信號可以用于標(biāo)記一些和向細(xì)胞外轉(zhuǎn)運(yùn)的亞細(xì)胞器與途徑。 |
2樓2016-11-20 20:37:38
starseacow
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長春花細(xì)胞中的HSP90，換了新筆記本，鍵盤用的非常不習(xí)慣。 HSP90的那個序列可以視作為一種信號肽。 PM轉(zhuǎn)運(yùn)途徑即由細(xì)胞生物合成與分泌途徑，主要從ER去往細(xì)胞膜。另外的途徑就是細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)和液泡轉(zhuǎn)運(yùn)。 高爾基體的亞細(xì)胞定位可以用一些特定的蛋白用來標(biāo)記，比如擬南芥中的 Glycosyltransferase 以及1,2 α-mannosidase ，連上熒光蛋白,35S啟動子控制下就可以定位表達(dá)。 不過我認(rèn)為一般把目的基因連熒光蛋白再和標(biāo)記共定位比較這種方法不是很靠譜，王道還是有條件的情況下做亞細(xì)胞組份的western。 |
4樓2016-11-21 03:12:36
5樓2016-11-21 17:00:20
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