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風(fēng)雨斷腸人aa銀蟲 (小有名氣)
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[交流]
PCR末端加A原理？
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| 用普通的Taq酶PCR時(shí)在3‘末端都會(huì)多加一個(gè)A，請(qǐng)問這是為什么？請(qǐng)大家講原理，有參考文獻(xiàn)更好。 |
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2樓2016-02-24 10:56:16
kangaroo0513
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3樓2016-02-24 10:58:51
風(fēng)雨斷腸人aa
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4樓2016-02-24 11:04:35
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5樓2016-02-24 11:09:37
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7樓2016-02-24 23:56:02
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8樓2016-02-25 00:29:12
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風(fēng)雨斷腸人aa: 金幣+5 2016-02-27 18:45:44
因?yàn)镻CR用的DNA聚合酶無(wú)5 ' 到 3 ‘外切酶的活性,校對(duì)功能較差,而具備在dNTP過量時(shí),在產(chǎn)物末端添加A,故PCR產(chǎn)物末端有A,若擴(kuò)增PCR產(chǎn)物較長(zhǎng),需要高準(zhǔn)確率時(shí),采用高保真酶,末端不加A，而高保真酶擴(kuò)增產(chǎn)物要連TA克隆時(shí),可加入Taq酶,在產(chǎn)物末端加A，因?yàn)橐话鉖CR采用的是Taq酶擴(kuò)增,產(chǎn)物末端都有A。 |
9樓2016-02-26 15:51:26
風(fēng)雨斷腸人aa
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10樓2016-02-26 21:48:02
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