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毛細管電泳PA800（beckman）實驗常見問題解答
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毛細管電泳PA800（beckman）實驗常見問題解答 1.無樣品峰出現(xiàn) 1.1檢查電流是否穩(wěn)定 1.1.1 沒有電流 可能原因：毛細管堵塞或斷裂 解決方案：用水沖洗毛細管，并觀察是否有水流出，若無水流出請拆下卡盒檢查毛細管兩端和窗口是否斷裂；毛細管沒有斷裂的話可以用水反向高壓沖洗以試圖解決此問題。緩沖溶液需要過濾，將樣品過濾或者離心去除其中的顆粒。 1.1.2電流波動很大，直至幾乎消失 可能原因：緩沖溶液中有氣泡產(chǎn)生或者區(qū)帶中樣品析出 解決方案：將緩沖溶液超聲脫氣，如果還有此現(xiàn)象發(fā)生，則可能是樣品區(qū)帶有析出，可以通過降低樣品濃度/延長ramp time來試圖解決這一問題；對于在緩沖溶液中溶解度不高的樣品則需要在緩沖溶液中加入添加劑以解決此問題。 1.1.3電流初始值較小，后逐漸增大 可能原因：樣品進樣量過大 方法：減少進樣量，通常進樣參數(shù)設置在0.5psi,5sec左右 1.1.4電流正常 a.樣品濃度過低 使用高濃度樣品測試，如果無法解決則有可能是以下其他原因 b.檢測波長設置不正確 請確認被分析物的特征吸收，檢查方法中的檢測波長設置 c.分離極性錯誤 對于蛋白樣品，請注意蛋白在分離條件下其PI及所帶電荷；對于核酸樣品，通常條件下會帶負電荷 d.樣品在毛細管內(nèi)壁吸附 對于蛋白及核酸樣品應盡量采用涂層毛細管分離，或采用極端pH條件或動態(tài)涂層防止樣品吸附。 e.光學檢測器或光纖損壞 進行標準樣品的測試，如果沒有對應的結果出現(xiàn)，則有可能存在硬件問題，請聯(lián)系工程師 1.2檢查毛細管窗口 是否有透明窗口 忘記開毛細管窗口或窗口位置不正 重新開毛細管檢測窗口，或?qū)⒋翱谡{(diào)整到正確位置 2.樣品峰出現(xiàn)拖尾 樣品在毛細管內(nèi)壁吸附 對于蛋白及核酸樣品應盡量采用涂層毛細管分離，或采用極端pH條件或動態(tài)涂層防止樣品吸附。 3.樣品峰形不對稱 3.1毛細管入口 毛細管入口切口不平齊 重新切割毛細管入口，注意毛細管切割方法，不可以用力過猛或反復刮擦 3.2更改樣品溶劑 緩沖溶液與樣品溶液電解率差別過大,可采用緩沖溶液作為樣品溶劑 4.樣品峰過寬 降低樣品進樣量 有改善:樣品濃度太大,可降低樣品濃度或減少進樣量 無改善:樣品本身性質(zhì)不均一,此原因主要是針對蛋白樣品，小分子樣品發(fā)生的概率較低 5.遷移時間不穩(wěn)定 5.1出峰時間不穩(wěn)定且無規(guī)律 緩沖溶液與毛細管內(nèi)壁平衡較慢,每次樣品運行之間避免用NaOH沖洗毛細管 5.2出峰時間依次后延 樣品中有物質(zhì)易發(fā)生吸附.首先在每次樣品運行之前用0.1N NaOH短時間沖洗毛細管，看遷移時間能否重復，如果效果不佳請使用涂層毛細管來改善結果或者將樣品再次處理，以去除樣品中易吸附的組分 6.峰形和出峰時間不穩(wěn)定 更換緩沖溶液種類 峰形和時間穩(wěn)定,緩沖溶液不穩(wěn)定，易電解，或者是樣品在原緩沖溶液條件下不穩(wěn)定,更換其它種類的緩沖溶液 峰形和出峰情況仍不穩(wěn)定,樣品中物質(zhì)易在毛細管內(nèi)壁吸附,可采用涂層毛細管來克服此問題，或?qū)悠愤M行前處理 7.電流泄漏（Current Leakage） 檢查毛細管是否在窗口處斷裂 毛細管斷裂 :毛細管內(nèi)緩沖溶液流出造成電流泄漏,更換新毛細管，并用水清洗光纖頭及檢測窗口 毛細管無斷裂 :實驗環(huán)境濕度過大,使用抽濕機，并打開儀器Cartridge Cover；如果沒有抽濕機可以使用空調(diào)，在濕度過大的情況下可在儀器關閉時放置干燥劑，但是在儀器運行時一定要將干燥劑取出 8.無法加氣壓 檢查瓶塞是否蓋緊或更換瓶塞 更換后問題解決, 瓶塞老化，失去彈性,請購買新的瓶塞，并注意瓶塞不可烘干，只能自然晾干 瓶頸處有液體，導致瓶塞易滑,向瓶中裝液體時不要過滿，也不要沾濕瓶頸 若瓶塞無問題，可先采用真空方式，若真空方式可以使用，但壓力仍不可用,壓力系統(tǒng)問題,請聯(lián)系工程師 9.遷移時間可重復但峰面積重復性不好 重新切割毛細管兩端 若問題解決 毛細管入口處不平,重新切割毛細管入口，注意毛細管切割方法，不可以用力過猛或反復刮擦 問題依然存在，嘗試電動進樣,若電動進樣可保持重現(xiàn)，則壓力控制或氣路存在問題,請聯(lián)系工程師 10.毛細管或電極易折斷 檢查瓶蓋是否老化,瓶蓋老化,購買新的瓶蓋 電極是否不垂直,電極不垂直,將電極拉直 |
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 毛細管電泳 |
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