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毛細(xì)管電泳PA800（beckman）實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題解答
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毛細(xì)管電泳PA800（beckman）實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題解答 1.無(wú)樣品峰出現(xiàn) 1.1檢查電流是否穩(wěn)定 1.1.1 沒(méi)有電流 可能原因：毛細(xì)管堵塞或斷裂 解決方案：用水沖洗毛細(xì)管，并觀察是否有水流出，若無(wú)水流出請(qǐng)拆下卡盒檢查毛細(xì)管兩端和窗口是否斷裂；毛細(xì)管沒(méi)有斷裂的話可以用水反向高壓沖洗以試圖解決此問(wèn)題。緩沖溶液需要過(guò)濾，將樣品過(guò)濾或者離心去除其中的顆粒。 1.1.2電流波動(dòng)很大，直至幾乎消失 可能原因：緩沖溶液中有氣泡產(chǎn)生或者區(qū)帶中樣品析出 解決方案：將緩沖溶液超聲脫氣，如果還有此現(xiàn)象發(fā)生，則可能是樣品區(qū)帶有析出，可以通過(guò)降低樣品濃度/延長(zhǎng)ramp time來(lái)試圖解決這一問(wèn)題；對(duì)于在緩沖溶液中溶解度不高的樣品則需要在緩沖溶液中加入添加劑以解決此問(wèn)題。 1.1.3電流初始值較小，后逐漸增大 可能原因：樣品進(jìn)樣量過(guò)大 方法：減少進(jìn)樣量，通常進(jìn)樣參數(shù)設(shè)置在0.5psi,5sec左右 1.1.4電流正常 a.樣品濃度過(guò)低 使用高濃度樣品測(cè)試，如果無(wú)法解決則有可能是以下其他原因 b.檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)置不正確 請(qǐng)確認(rèn)被分析物的特征吸收，檢查方法中的檢測(cè)波長(zhǎng)設(shè)置 c.分離極性錯(cuò)誤 對(duì)于蛋白樣品，請(qǐng)注意蛋白在分離條件下其PI及所帶電荷；對(duì)于核酸樣品，通常條件下會(huì)帶負(fù)電荷 d.樣品在毛細(xì)管內(nèi)壁吸附 對(duì)于蛋白及核酸樣品應(yīng)盡量采用涂層毛細(xì)管分離，或采用極端pH條件或動(dòng)態(tài)涂層防止樣品吸附。 e.光學(xué)檢測(cè)器或光纖損壞 進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)樣品的測(cè)試，如果沒(méi)有對(duì)應(yīng)的結(jié)果出現(xiàn)，則有可能存在硬件問(wèn)題，請(qǐng)聯(lián)系工程師 1.2檢查毛細(xì)管窗口 是否有透明窗口 忘記開(kāi)毛細(xì)管窗口或窗口位置不正 重新開(kāi)毛細(xì)管檢測(cè)窗口，或?qū)⒋翱谡{(diào)整到正確位置 2.樣品峰出現(xiàn)拖尾 樣品在毛細(xì)管內(nèi)壁吸附 對(duì)于蛋白及核酸樣品應(yīng)盡量采用涂層毛細(xì)管分離，或采用極端pH條件或動(dòng)態(tài)涂層防止樣品吸附。 3.樣品峰形不對(duì)稱 3.1毛細(xì)管入口 毛細(xì)管入口切口不平齊 重新切割毛細(xì)管入口，注意毛細(xì)管切割方法，不可以用力過(guò)猛或反復(fù)刮擦 3.2更改樣品溶劑 緩沖溶液與樣品溶液電解率差別過(guò)大,可采用緩沖溶液作為樣品溶劑 4.樣品峰過(guò)寬 降低樣品進(jìn)樣量 有改善:樣品濃度太大,可降低樣品濃度或減少進(jìn)樣量 無(wú)改善:樣品本身性質(zhì)不均一,此原因主要是針對(duì)蛋白樣品，小分子樣品發(fā)生的概率較低 5.遷移時(shí)間不穩(wěn)定 5.1出峰時(shí)間不穩(wěn)定且無(wú)規(guī)律 緩沖溶液與毛細(xì)管內(nèi)壁平衡較慢,每次樣品運(yùn)行之間避免用NaOH沖洗毛細(xì)管 5.2出峰時(shí)間依次后延 樣品中有物質(zhì)易發(fā)生吸附.首先在每次樣品運(yùn)行之前用0.1N NaOH短時(shí)間沖洗毛細(xì)管，看遷移時(shí)間能否重復(fù)，如果效果不佳請(qǐng)使用涂層毛細(xì)管來(lái)改善結(jié)果或者將樣品再次處理，以去除樣品中易吸附的組分 6.峰形和出峰時(shí)間不穩(wěn)定 更換緩沖溶液種類 峰形和時(shí)間穩(wěn)定,緩沖溶液不穩(wěn)定，易電解，或者是樣品在原緩沖溶液條件下不穩(wěn)定,更換其它種類的緩沖溶液 峰形和出峰情況仍不穩(wěn)定,樣品中物質(zhì)易在毛細(xì)管內(nèi)壁吸附,可采用涂層毛細(xì)管來(lái)克服此問(wèn)題，或?qū)悠愤M(jìn)行前處理 7.電流泄漏（Current Leakage） 檢查毛細(xì)管是否在窗口處斷裂 毛細(xì)管斷裂 :毛細(xì)管內(nèi)緩沖溶液流出造成電流泄漏,更換新毛細(xì)管，并用水清洗光纖頭及檢測(cè)窗口 毛細(xì)管無(wú)斷裂 :實(shí)驗(yàn)環(huán)境濕度過(guò)大,使用抽濕機(jī)，并打開(kāi)儀器Cartridge Cover；如果沒(méi)有抽濕機(jī)可以使用空調(diào)，在濕度過(guò)大的情況下可在儀器關(guān)閉時(shí)放置干燥劑，但是在儀器運(yùn)行時(shí)一定要將干燥劑取出 8.無(wú)法加氣壓 檢查瓶塞是否蓋緊或更換瓶塞 更換后問(wèn)題解決, 瓶塞老化，失去彈性,請(qǐng)購(gòu)買新的瓶塞，并注意瓶塞不可烘干，只能自然晾干 瓶頸處有液體，導(dǎo)致瓶塞易滑,向瓶中裝液體時(shí)不要過(guò)滿，也不要沾濕瓶頸 若瓶塞無(wú)問(wèn)題，可先采用真空方式，若真空方式可以使用，但壓力仍不可用,壓力系統(tǒng)問(wèn)題,請(qǐng)聯(lián)系工程師 9.遷移時(shí)間可重復(fù)但峰面積重復(fù)性不好 重新切割毛細(xì)管兩端 若問(wèn)題解決 毛細(xì)管入口處不平,重新切割毛細(xì)管入口，注意毛細(xì)管切割方法，不可以用力過(guò)猛或反復(fù)刮擦 問(wèn)題依然存在，嘗試電動(dòng)進(jìn)樣,若電動(dòng)進(jìn)樣可保持重現(xiàn)，則壓力控制或氣路存在問(wèn)題,請(qǐng)聯(lián)系工程師 10.毛細(xì)管或電極易折斷 檢查瓶蓋是否老化,瓶蓋老化,購(gòu)買新的瓶蓋 電極是否不垂直,電極不垂直,將電極拉直 |
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 毛細(xì)管電泳 |
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