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pcr后，電泳跑出來的DNA條帶很弱，是怎么問題？

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1樓 2017-04-07 13:29:16

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stabilized

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西門吹雪170: 金幣+3, 鼓勵回帖交流 2017-04-08 08:39:58

我也出過這樣的情況，DNA濃度沒問題，PCR后有一半的條帶不亮。可能是引物和DNA匹配有些差異，比如說我的引物完全按A種青霉DNA設(shè)計的，但是PCR的這個DNA是B種青霉的。
你的這個很正常吧，產(chǎn)物分子量很小。溶膠和跑膠嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)來做會好些。
我是同時把循環(huán)數(shù)+5，引物量加倍，最后做出的圖形很漂亮。

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堅持！

2樓2017-04-07 16:23:38

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卡維斯

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西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2017-04-08 08:40:14

引物二聚體很亮，建議減少引物、提高退火溫度
條帶太弱，建議適當(dāng)增加循環(huán)、增加模板量或者降低退火溫度

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3樓2017-04-07 22:23:28

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流水青苔

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樓主有空的話，可以做下這樣的實驗嗎？假設(shè)現(xiàn)在退火溫度為55度，①55-5cycle,56-5cycle,57-5cycle,58-5cycle,59-5cycle,60-10cycle。②60-5cycle,59-5cycle,58-5cycle,57-5cycle,56-15cycle。不喜勿噴，純屬個人想知道結(jié)果，如有問題望指正。

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4樓2017-04-07 23:25:47

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luil121

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如果是跑膠后染色的話可以考慮下配置新的染液

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5樓2017-04-08 00:22:43

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yingxiaoying

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marker亮不啊換實驗室后發(fā)現(xiàn)電泳儀器，染色試劑也很關(guān)鍵

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6樓2017-04-10 13:30:28

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2樓: Originally posted by stabilized at 2017-04-07 16:23:38
我也出過這樣的情況，DNA濃度沒問題，PCR后有一半的條帶不亮�？赡苁且锖虳NA匹配有些差異，比如說我的引物完全按A種青霉DNA設(shè)計的，但是PCR的這個DNA是B種青霉的。
你的這個很正常吧，產(chǎn)物分子量很小。溶膠和跑膠 ...

嗯嗯，好的，謝謝~有的時候還會出現(xiàn)不出條帶的問題

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7樓2017-04-13 10:10:05

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3樓: Originally posted by 卡維斯 at 2017-04-07 22:23:28
引物二聚體很亮，建議減少引物、提高退火溫度
條帶太弱，建議適當(dāng)增加循環(huán)、增加模板量或者降低退火溫度

好的，謝謝~~

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8樓2017-04-13 10:10:21

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4樓: Originally posted by 流水青苔 at 2017-04-07 23:25:47
樓主有空的話，可以做下這樣的實驗嗎？假設(shè)現(xiàn)在退火溫度為55度，①55-5cycle,56-5cycle,57-5cycle,58-5cycle,59-5cycle,60-10cycle。②60-5cycle,59-5cycle,58-5cycle,57-5cycle,56-15cycle。不喜勿噴，純屬個人想知 ...

五個循環(huán)會不會太少了？？？

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9樓2017-04-13 10:11:30

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6樓: Originally posted by yingxiaoying at 2017-04-10 13:30:28
marker亮不啊換實驗室后發(fā)現(xiàn)電泳儀器，染色試劑也很關(guān)鍵

marker 很亮，這些應(yīng)該都沒很大問題，師兄他們也在用，跑出來的帶蠻好的

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10樓2017-04-13 10:12:48

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