 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 10 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1537 | 回復(fù): 9 | ||
[求助]
緊急求助~PCR產(chǎn)物電泳條帶，特別奇怪，LZ好崩潰，，跪求各位提供幫助 已有2人參與
|
|
各位好~~小妹新手在此求助 打算做qPCR標(biāo)準(zhǔn)品，現(xiàn)在用qPCR引物做普通PCR，擴(kuò)增條件95℃8min，（95℃ 30s /55℃ 30S / 72℃ 30S ）35個(gè)循環(huán)，72 10min，體系takra premix Taq（Ex taq verson 2.0）10u /正反引物（10mM）各1u/模版1u，電泳條帶有兩條，還算清晰，但并不是目的條帶，其實(shí)目的條帶只有100多bp, 條帶居然有1000多bp,提高退火溫度到60℃，條帶也是這樣的，空白對照除了引物并沒有其它條帶，請各位幫忙分析下原因，有沒有人遇到這種情況？ 還有一開始以為是引物合成錯(cuò)了，重新合成了一份，條帶依然是這樣的，我實(shí)在沒轍了，，引物是采用文獻(xiàn)里面的，很多外文文獻(xiàn)都用過。。。。我的模版DNA是海水全基因組DNA 附電泳圖 marker是DL2000 圖1 膠孔依次是marker/sample1/blank 圖2 膠孔依次是marker/sample1/sample2 圖片1.jpg 圖片2.jpg |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有219人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
zhangjingwjs
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 7.8
- 散金: 240
- 紅花: 6
- 帖子: 123
- 在線: 49.1小時(shí)
- 蟲號: 2058795
- 注冊: 2012-10-13
- 專業(yè): 文化社會學(xué)
2樓2015-11-11 20:42:02
3樓2015-11-11 20:45:29
我愛羅的風(fēng)沙
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 31.5
- 帖子: 20
- 在線: 3.5小時(shí)
- 蟲號: 3362175
- 注冊: 2014-08-11
- 性別: GG
- 專業(yè): 基因表達(dá)調(diào)控與表觀遺傳學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+3, 鼓 2015-11-11 22:58:02
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+3, 鼓 2015-11-11 22:58:02
| 樓主你好。你看你從基因組里面P出了很多條帶，但是沒有目的條帶，這說明了一個(gè)事實(shí)：你設(shè)計(jì)的引物的特異性不夠好，所以才能P出非特異性的條帶。目的條帶沒有P出來，可能是因?yàn)椋孩偻嘶饻囟炔徽_，雖然說是要TM減5-10度，但是具體溫度需要自己摸索，建議拉一個(gè)溫度梯度。②樓主之后72度 10分鐘我認(rèn)為這是不正確的，可以嘗試循環(huán)后保持4度或者直接取出產(chǎn)物。 |
4樓2015-11-11 22:18:23
zhangjingwjs
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 7.8
- 散金: 240
- 紅花: 6
- 帖子: 123
- 在線: 49.1小時(shí)
- 蟲號: 2058795
- 注冊: 2012-10-13
- 專業(yè): 文化社會學(xué)
5樓2015-11-11 23:47:18
zhangjingwjs
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 7.8
- 散金: 240
- 紅花: 6
- 帖子: 123
- 在線: 49.1小時(shí)
- 蟲號: 2058795
- 注冊: 2012-10-13
- 專業(yè): 文化社會學(xué)
6樓2015-11-11 23:48:54
534720018
至尊木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 7 (幼兒園)
- 金幣: 16954.6
- 散金: 20
- 紅花: 15
- 帖子: 2505
- 在線: 190.4小時(shí)
- 蟲號: 1394302
- 注冊: 2011-09-07
- 性別: GG
- 專業(yè): 環(huán)境工程
7樓2015-11-11 23:52:04
|
如果其他沒有問題的話，建議你自己設(shè)計(jì)引物吧，qrt-pcr蠻好設(shè)計(jì)的啊，普通pcr那個(gè)72℃10分可以加上的 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
8樓2015-11-12 08:57:50
 |
9樓2015-11-12 11:59:11
qinqqjiajia
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 8 (幼兒園)
- 金幣: 4.4
- 帖子: 20
- 在線: 12.6小時(shí)
- 蟲號: 1139081
- 注冊: 2010-11-04
- 專業(yè): 水產(chǎn)生物營養(yǎng)與飼料學(xué)
10樓2015-11-12 13:21:30
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 小二郎 的主題更新
| 10 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 學(xué)碩274求調(diào)劑 +5 | Li李魚 2026-03-26 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 食品工程專碩一志愿中海洋309求調(diào)劑 +3 | 小張zxy張 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +4 | Sanmu-124 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料與化工085600，總分304，本科有兩篇sci參與，求調(diào)劑 +10 | 幸運(yùn)的醬醬 2026-03-22 | 12/600 |
|
|
[考研] 一志愿北京化工大學(xué) 070300 學(xué)碩 336分 求調(diào)劑 +9 | vv迷 2026-03-22 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑，一志愿南農(nóng)083200食品科學(xué)與工程 +5 | XQTJZ 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿吉大071010，316分求調(diào)劑 +3 | xgbiknn 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +11 | junqihahaha 2026-03-26 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 351求調(diào)劑 +4 | 麥克阿磊 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
 一志愿廈門大學(xué)化學(xué)學(xué)碩307求調(diào)劑
+8
|
y7czhao 2026-03-26 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 中國科學(xué)院深圳先進(jìn)技術(shù)研究院-光纖傳感課題組招生-中國科學(xué)院大學(xué)、深圳理工大學(xué)聯(lián)培 +5 | YangTyu1 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料277求調(diào)劑 +5 | min3 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 打過很多競賽，085406控制工程300分，求調(diào)劑 +3 | askeladz 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +4 | 汪��？！ 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)學(xué)碩求調(diào)劑 +7 | 小羊睡著了? 2026-03-23 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 306求0703調(diào)劑一志愿華中師范 +10 | 紙魚ly 2026-03-21 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 277分求調(diào)劑，跨調(diào)材料 +3 | 考研調(diào)劑lxh 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 269求調(diào)劑 +4 | 我想讀研11 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 工科0856求調(diào)劑 +5 | 沐析汀汀 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 070300，一志愿北航320求調(diào)劑 +3 | Jerry0216 2026-03-22 | 5/250 |
|