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暖陽ny2

新蟲 (初入文壇)

[求助] 電泳的時(shí)候,總DNA跑出條帶,PCR擴(kuò)增后沒有條帶,都有什么原因啊 已有5人參與

我用的是金黃色葡萄球菌,5%chelex-100作的裂解液,高溫水煮方法提的DNA
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quiller2000

木蟲 (著名寫手)

【答案】應(yīng)助回帖


感謝參與,應(yīng)助指數(shù) +1
dllchina: 金幣+1, good~ 2014-04-24 21:38:08
你這個(gè)問題太大了,首先你要確定一下你的DNA的質(zhì)量,然后PCR的時(shí)候,有沒有正對照?如果CK+是可以的,那么要考慮你的DNA質(zhì)量了。
致良知
2樓2014-04-23 20:58:32
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yuren2009

木蟲 (正式寫手)

【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與,應(yīng)助指數(shù) +1
影響PCR擴(kuò)增結(jié)果原因多了,沒有條帶,就試著從源頭找起,如引物特異性,體系,程序等。
學(xué)習(xí)使你立于不敗之地
3樓2014-04-23 21:11:47
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20093651

鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)

【答案】應(yīng)助回帖


感謝參與,應(yīng)助指數(shù) +1
dllchina: 金幣+1 2014-04-24 21:37:56
引物量,DNA濃度太高,PCR條件沒弄好
但行好事,莫問前程
4樓2014-04-24 09:34:40
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a188202881a

鐵蟲 (初入文壇)

【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與,應(yīng)助指數(shù) +1
是不是pcr體系沒找好,或者是dna提純不好

[ 發(fā)自小木蟲客戶端 ]
5樓2014-04-24 09:49:17
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xichun

新蟲 (初入文壇)

多半和你的引物設(shè)計(jì)和量有關(guān)系,體系也可能有關(guān)系。
6樓2014-04-24 10:19:13
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hgdcongcong

木蟲 (著名寫手)

【答案】應(yīng)助回帖

感謝參與,應(yīng)助指數(shù) +1
首先跑電泳能出條帶,請問條帶位置正確嗎?如果不正確,會不會是DNA制備過程中講解了,或者其他原因?qū)е翫NA受損;如果條帶位置正確,那么就很有可能是PCR體系環(huán)節(jié)有問題,比如使用的引物是否有效(特異性、合成引物本身的質(zhì)量),擴(kuò)增參數(shù)設(shè)置(退火溫度是否合適、延伸時(shí)間是否足夠)是否正確等等。
7樓2014-04-24 16:47:12
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暖陽ny2

新蟲 (初入文壇)

引用回帖:
7樓: Originally posted by hgdcongcong at 2014-04-24 16:47:12
首先跑電泳能出條帶,請問條帶位置正確嗎?如果不正確,會不會是DNA制備過程中講解了,或者其他原因?qū)е翫NA受損;如果條帶位置正確,那么就很有可能是PCR體系環(huán)節(jié)有問題,比如使用的引物是否有效(特異性、合成引物 ...

謝謝哦,驗(yàn)證了下,應(yīng)該是引物有問題
8樓2014-05-05 11:28:09
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18761615793

木蟲 (正式寫手)

小蟲

常常遇到這種問題,換了試劑盒使用高保真Taq酶擴(kuò)增,效果都不錯(cuò)
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
9樓2015-07-16 15:47:46
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