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WSW_Alone木蟲 (著名寫手)
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[求助]
試劑盒提取細菌DNA后，跑膠檢測有條帶，但是PCR后卻無擴增產(chǎn)物。
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如題，土壤篩選的菌，用試劑盒提取DNA后，跑膠檢測（如圖）有條帶，進行16S rDNA PCR擴增，結(jié)果卻沒有。請教一下哪里出了問題？（注：上一批也是這么做的，大部分都跑出來了，不知道為何這次都沒出來，條件什么的都一樣） 體系是通用的，我用的引物是27f/1492r 擴增條件：94℃ 5min 94℃ 45s 56℃ 45s 72℃ 90s 32個循環(huán) 72℃ 20min 求大神指導(dǎo)，不勝感激。 試劑盒提取DNA后直接跑膠檢測結(jié)果 PCR產(chǎn)物跑膠結(jié)果 |
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 土壤微生物 |
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dakang87
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4樓2012-07-02 13:08:44
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
WSW_Alone: 金幣+4, ★★★很有幫助, 言之有理，考慮加一個之前擴增出來了的菌進行對照。 2012-06-28 11:04:23
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| 這個可能因素非常多。建議設(shè)一個正對照，提取單一菌株基因組，用來檢測你的pcr體系。要是能出說明是你提取基因組的問題�；蚪M中可能有抑制pcr的成分。 |
3樓2012-06-27 20:48:22
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設(shè)置陽性對照和空白對照（排除試劑失效或污染的情況） 如果擴增不出來再對退火溫度進行梯度實驗，確定一個合適的溫度（可以擴增，且非特異性擴增少） 還不行的話考慮加些增強劑或直接用premix（我后面基本上用預(yù)混液了。 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
10樓2017-01-16 08:39:48
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