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WSW_Alone木蟲 (著名寫手)
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[求助]
試劑盒提取細菌DNA后，跑膠檢測有條帶，但是PCR后卻無擴增產(chǎn)物。
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如題，土壤篩選的菌，用試劑盒提取DNA后，跑膠檢測（如圖）有條帶，進行16S rDNA PCR擴增，結(jié)果卻沒有。請教一下哪里出了問題？（注：上一批也是這么做的，大部分都跑出來了，不知道為何這次都沒出來，條件什么的都一樣） 體系是通用的，我用的引物是27f/1492r 擴增條件：94℃ 5min 94℃ 45s 56℃ 45s 72℃ 90s 32個循環(huán) 72℃ 20min 求大神指導(dǎo)，不勝感激。 試劑盒提取DNA后直接跑膠檢測結(jié)果 PCR產(chǎn)物跑膠結(jié)果 |
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 土壤微生物 |
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sk_yb
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
WSW_Alone: 金幣+4, ★★★很有幫助, 言之有理，考慮加一個之前擴增出來了的菌進行對照。 2012-06-28 11:04:23
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵應(yīng)助 2012-06-28 15:43:41
WSW_Alone: 金幣+4, ★★★★★最佳答案, 設(shè)置陽性對照發(fā)現(xiàn)應(yīng)該是試劑出了點問題，還是我自己做實驗不夠嚴謹，多謝多謝。 2012-07-03 20:12:51
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| 這個可能因素非常多。建議設(shè)一個正對照，提取單一菌株基因組，用來檢測你的pcr體系。要是能出說明是你提取基因組的問題�；蚪M中可能有抑制pcr的成分。 |
3樓2012-06-27 20:48:22
2樓2012-06-27 17:10:16
dakang87
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4樓2012-07-02 13:08:44
xiadongliang
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5樓2012-07-03 08:28:29
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