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關(guān)Q想畢業(yè)新蟲 (小有名氣)
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[求助]
T4-DNA連接酶使用體系 已有1人參與
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請(qǐng)問下使用過T4-DNA連接酶的朋友們,你們的反應(yīng)體系是怎樣的?還有載體長(zhǎng)度和目的片段長(zhǎng)度都是多長(zhǎng)呀? 我自己的載體片段是5000多,目的片段2000,雙酶切驗(yàn)證的時(shí)候,載體片段很亮,但是目的片段只能看見非常非常淺的一條帶,反應(yīng)體系是4°過夜連接,兩個(gè)片段各2μl,T4-DNA連接酶1μl,buffer1μl,水4μl,有大神知道是什么原因嗎?感謝! @biostar2009 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
金蟲 (正式寫手)
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你的反應(yīng)體系里目標(biāo)片段數(shù)量太少了。載體片段:目標(biāo)片段在1:4~1:10之間比較合適。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |


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新蟲 (小有名氣)
新蟲 (小有名氣)
新蟲 (小有名氣)
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嗯嗯,我看那個(gè)說明書上也是這么寫得,但是因?yàn)閷?shí)驗(yàn)室的師姐之前都是這么做的所以也跟著這么做了,我去試試您說的,感謝回復(fù) 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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通常是16或者22,前段:載體的摩爾比控制在3:1-10:1 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |


新蟲 (小有名氣)
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